Genotecas procedentes de microdisección cromosómica en especies domésticas

• Autores: F.A. Ponde de León
• Localización: Archivos de zootecnia, ISSN-e 1885-4494, ISSN 0004-0592, Vol. 45, Nº 170-171, 1996, págs. 165-174
• Idioma: español
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• Resumen

  • La obtención de genotecas a partir del ADN de cromosomas completos o de regiones subcromosómicas es una alternativa a la búsqueda al azar de marcadores moleculares en genotecas construidas al modo tradicional. Hemos adaptado la metodología propuesta por Saunders et al. (1988) para la microdisección cromosómica y hemos producido genotecas a partir de cromosomas o de regiones su cromosómicas. La estrategia se basa en reducir el procedimiento de purificación de cromosomas microdiseccionados o de fragmentos cromosómicos al volumen de un nanolitro. El DNA purificado se digiere con Sau3A l y se liga a moléculas adaptadoras, Los sitios de adaptación se utilizan entonces para la amplficación por Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR) de los fragmentos de DNA cromosómico, Los productos de estas reacciones cromosómicas de PCR se han usado para la identificación especifica de cromosomas y para confirmarlas homologadas cromosómicas interespecificas y las reorganizaciones cromosómicas, de manera similar, los productos de PCR cromosómico se han utilizado para construir genotecas específicas de un cromosoma. La búsqueda en estas genotecas con objeto de identificar clones con secuencias de microsatélites, ha hecho posible la producción de mapas de ligamiento de cromosomas bovinos con una resolución de <3 cM. Hemos producido genotecas de ADN que describen aproximadamente 30 p. cien, 50 p. cien y 8 p. cien del genoma bovino, de la gallina y porcino respectivamente