Resumen de Método simple para la detección múltiple de viroides de cítricos
Isidro H. Almeyda León, Mario A. Rocha Peña, M. Magdalena Iracheta Cárdenas, Fermín Orona Castro, Craig J. Kahlke
La deteccion de viroides mediante RT-PCR en Mexico es de uso comun en los laboratorios de acreditacion para determinar la calidad sanitaria de plantas de citricos, cuando se van a utilizar arboles madre para propagar plantas de vivero. En el presente trabajo se describe una metodologia simple para la deteccion multiple de los viroides Citrus exocortis viroid (CEVd), CVd II, y Citrus viroid III (CVd III) en una sola reaccion de RT-PCR. La extraccion de acidos nucleicos se efectuo con cantidades minimas (250 mg) de tejido, y adicionando 1% polivinilpirrolidona en la solucion salina de extraccion de glicina-fosfato. La deteccion de los tres viroides fue exitosa cuando las reacciones de RT se efectuaron con 2.0 ¿Êg de ARN, 1.0-1.5 mM de dNTP¿fs, 0.90 ¿ÊM, del iniciador complementario (C) para CEVd, y 0.49 ¿ÊM para los correspondientes iniciadores C para CVd II y CVd III, respectivamente, seguidas por reacciones de PCR con 2-4 ¿ÊL de cADN procedente de RT y 10, 5, 5 pmoles del juego de iniciadores homologos (H) y C para CEVd, CVd II y CVd III. Al usar menos de 1.0 ¿ÊM de dNTP¿fs, asi como cantidades iguales de los iniciadores C en las reacciones de RT y cantidades iguales del juego de iniciadores C y H para CEVd and CVd II y CVd III en las reacciones de PCR, proporcionaron deteccion simultanea confiable para CVd II y CVd III, pero resultados erraticos con CEVd.
