Resumen de Las determinaciones de glutamato utilizando Amplex Red Glutamic Acid Assay están afectadas por el agonista P2X BzATP

Patricia Marín García, Jesús Sánchez Nogueiro, David Agustín León Navarro

• español

  El compuesto Amplex Red (AR) es el sustrato fluorogénico para la peroxidasa de rábano (HRP) más estable y sensible. Así, en presencia de peróxido de hidrógeno (H2O2), el AR (un compuesto no fluorescente) es convertido en resorufina (un producto fuertemente fluorescente) por la acción de la HRP. En los últimos años se han realizado muchos ensayos utilizando este compuesto para cuantificar un variado surtido de análisis, así como para detectar la actividad de muchas y variadas enzimas. Recientemente hemos demostrado que el BzATP, un agonista de varios receptores ionotrópicos de nucleótidos (P2X), interfiere con la oxidación del Amplex Red catalizada por la HRP. En el presente trabajo mostramos que las determinaciones de glutamato utilizando el kit Amplex Red Glutamic Acid/Glutamate Oxidase Assay están fuertemente interferidas por el BzATP. Estos datos son realmente interesantes porque demuestran que la fluorescencia de la resorufina, en presencia del BzATP, no es proporcional a la concentración de glutamato y, por lo tanto, no debe ser utilizada como un método para medir la concentración de glutamato

• English

  Amplex Red (AR) reagent is the most stable and sensitive fluorogenic substrate known for horseradish peroxidase (HRP). Thus, in the presence of hydrogen peroxide (H2O2), AR (a nonfluorescent compound) is converted to resorufin (a strongly fluorescing product) by the action of HRP. In the last years, multiple assays have been developed using this reagent to quantify a diverse assortment of analyses and also to detect the activity of many different enzymes. We recently showed that BzATP, agonist of several ionotropic nucleotide receptors (P2X), interfered with Amplex Red oxidation catalyzed by HRP. In the present work we reported that glutamate determinations using Amplex Red Glutamic Acid/Glutamate Oxidase Assay Kit are also strongly interfered by BzATP. These data are really interesting because demonstrate that resorufin fluorescence, in the presence of BzATP, is not proportional to glutamate concentration and, therefore, it must not be used as method to measure glutamate concentration.ÿ