Resumen de Viabilidad de embriones bovinos producidos in vitro congelados-descongelados en dos medios de cultivo con ß-mercaptoetanol
S. Kmaid, A. Fernández, D. Fila, G. Roses, C. Larocca, I. Lago
El objetivo de este experimento fue examinar la influencia de dos medios en el desarrollo de embriones producidos por fertilización in vitro y congelados en un medio con 1,5 M de etilenglicol. 17 blastocitos tempranos, 46 blastocitos y 14 blastocitos expandidos de buena a excelente calidad fueron congelados en el día 7 posterior a la fecundación in vitro. Se utilizó como crioprotector 1,5 M de etilenglicol en mPBS suplementado con albúmina/ácido linoleico (40 mg/ ml) y 0,1 M de sacarosa. Los embriones se equilibraron 15-20 minutos a temperatura ambiente (20 °C). Las pajuelas se colocaron directamente a -7 °C, a los 2 minutos se realizó el seeding y se mantuvo 10 minutos. Luego de 60- 90 días, los embriones se descongelaron a temperatura ambiente durante 10 segundos y luego a 30 °C en baño de agua durante 30 segundos. Luego de 3 lavados en PBS más 10 p.100 de suero de ternero (CS) se formaron dos grupos con los embriones de distintos estadios. En un grupo se incluyeron en CR1aa (Rosenkrans et al., 1993) suplementado con 10 mM de ßmercaptoetanol (ß-ME) y 10 p.100 de suero fetal bovino (FCS), y el grupo control en TCM 199 suplementado con 10 mM de ß-ME y 10 p.100 de SFB. Se observaron a las 72 horas de cultivados a 5 p.100 de CO2, 38,5 °C de temperatura y 99 p.100 de humedad relativa. Se transfirieron 5 embriones en forma directa (no cultivados) a 3 receptoras. El número de embriones desarrollados o eclosionados estuvo significativamente asociado con el estadio del desarrollo embrionario y el medio de cultivo in vitro (p<0,01). Entre los blastocitos tempranos hubo una mayor proporción de embriones desarrollados y eclosionados en CR1aa que en TCM 199 (9/12 vs 1/5, p<0,05). En TCM 199, los blastocitos se desarrollaron en mayor proporción que en CR1aa (25/32, 1/5 y 4/ 9 respectivamente, p<0,05). Los resultados fueron analizados por el test de c2. Nosotros concluimos que el número de embriones eclosionados o desarrollados está aso- ciados significativamente con el estado de desarrollo del embrión y éste con el medio de desarrollo.
