Resumen de Aislamiento de ADN de calidad para la amplificación al azar de ADN polimórfico de mango
Gustavo A. Saldaña Robespierre, Efraín G. Salazar Yamarte
Con la finalidad de caracterizar los distintos genotipos del Banco de Germoplasma de mango del Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias (CENIAP) a traves de RAPD, fueron ajustadas las condiciones para la extraccion de ADN nuclear a partir de tejido foliar. Se realizaron pruebas para calibrar el buffer de extraccion, comparandose 4 soluciones de lisis y las condiciones iniciales de incubacion del tejido macerado.
De igual manera se hicieron pruebas factoriales de niveles de pesos de tejido foliar y volumen de buffer de lisis y las condiciones de precipitacion del ADN, lavado del sedimento final y efecto de la liofilizacion en la resuspension del sedimento de ADN. De los 4 protocolos distintos de extraccion, se obtuvo una mayor cantidad de ADN con la metodologia desarrollada por Doyle y Doyle. Los mejores resultados se obtuvieron macerando 250 mg de tejido foliar joven en 900 �Êl de tampon CTAB 2X con Tris Base calentado a 60 ��C, e incubando el macerado por 1 hora a la misma temperatura.
El almacenamiento de las muestras a .20 ��C hasta el dia siguiente mejoro la precipitacion del ADN al agregar isopropanol 98% frio. La incubacion del ADN a 37 ��C con la solucion de lavado (etanol 70%) permitio obtener sedimentos blancos. Finalmente la resuspension del sedimento de ADN se mejora al liofilizar los tejidos a .50 ��C durante 3 h. La metodologia probo ser eficiente con las variedades de mango, Mangifera indica L., estudiadas, permitiendo extraer ADN genomico en concentraciones superiores a 350 ng/�Êl en todos los casos.
