Efecto de tres diferentes fracciones de peso molecular alto del medio condicionado por células BRL en el desarrollo embrionario bovino in vitro

• Autores: Roger D. Salgado, José Barrera V., Samuel Correa Q., Luzardo Estrada L.
• Localización: Revista MVZ Córdoba, ISSN 0122-0268, ISSN-e 1909-0544, Vol. 6, Nº. 2, 2001, págs. 111-118
• Idioma: español
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    Para investigar la presencia de factores embriotróficos en el medio condicionado por células BRL (MCBRL), tres fracciones de peso molecular alto (>1, >5 y >10 Kda.) del MCBRL fueron adicionadas al medio TCM-199. Los oocitos fueron extraídos por el método de corte de ovarios de vacas sacrificadas en matadero, fueron madurados en una tensión del 5% de C02 en aire a 39ºC por 24 horas en medio TCM-199 suplementado con suero de vaca en estro al 10%. Después de la maduración, los oocitos fueron lavados tres veces en medio TL-HEPES y transferidos a las gotas de fertilización. Los oocitos fueron fertilizados en gotas de 50 ml de medio TL-FERT bajo aceite mineral espermatozoides congelados-descongelados, seleccionados por Swim-up y capacitados con heparina. Después de 18 a 20 horas post-fertilización, los cigotos fueron cultivados en MCBRL (control), fracción >1, >5 y >10 KDa. Las diferentes fracciones del MCBRL incrementaron la proporción de embriones que alcanzaron el estado de divididos (2- 8 células) después de tres días de cultivo (61-75%). La mayor proporción de embriones divididos fue alcanzada en la fracción > de 10 KDa. El desarrollo embrionario al estado de mórula/blastocisto no mostró diferencias significativas en las diferentes condiciones de cultivo (p>0.05). El recuento de núcleos no mostró diferencias significativas (P>0.05) en las diferentes condiciones de cultivo, con recuentos promedio en el rango de 15-23 células por embrión. En conclusión, los resultados muestran que la remoción de factores de peso molecular bajo del MCBRL mejoran el desarrollo embrionario al estado de divididos, pero es deficiente para promover el desarrollo mórula/blastocisto.

  • English

    To investigate the presence of embryotrophic factors in conditioned media from BRL cells (CMBRL), three high molecular weight fractions (>1, >5, and >10 kd) were added to TCM-199 culture media. Oocytes were obtained by cutting ovaries from cows at slaughter houses, then they were maturated under 5% CO2 at 39º C for 24 hours in TCM-199 media, supplemented with 10% of estrous cow serum. After maturation, oocytes were washed three times in TL-HEPES media, and transferred to fertilization drops. Oocytes were fertilized in 50ml drops of TL-FERT media under mineral oil, with frozen-thaw sperm, selected by Swim-up and capacitated with heparin. Eighteen to 20 hours after fertilization, zygotes were cultivated in CMBRL media alone (control) or with either >1, >5, and >10 KDa fractions. The different fractions incorporated in CMBRL increased the proportion of embryo that reach division (2-8 cells) compared to control after three culture days (61-75%). The higher proportion of divided embryos was obtained with the >10 KDa fraction. Embryo development to morula/blastocyst stage and nuclei count did not show significative differences under different culture conditions (P>0.05). The number of cells per embryo varied between 15 and 23 cells per embryo. In conclusion, these results showed that removal of low molecular weight factors from CMBRL improve embryo development to the division stage, however it is deficient to promote the morula/blastocyst stage.