Resumen de Clonal propagation and cryogenic storage of the medicinal plant Stevia rebaudiana

M. A. Shatnawi, R. A. Shibli, S. M. Abu-Romman, M. S. Al-Mazra�awi, Z. I. Al Ajlouni, A. Shatanawi, W. H. Odeh

• español

  Se logró con éxito la propagación clonal de Stevia rebaudiana, utilizando microtallos como primer paso para su conservación in vitro. Se obtuvo la proliferación máxima en el medio Murashige y Skoog (MS) suplementado con 1,5 mg L�1 de bencil amino purina y 0,2 mg L�1 de ácido indol-3-butírico (IBA). Las auxinas aumentaron el porcentaje de enraizamiento de los brotes en la concentración de 0,4 mg L�1 de IBA, ácido indol-3-acético o el ácido naftalen acético, pero no se produjo enraizamiento sin regulador del crecimiento vegetal. Se logró una supervivencia del 90% cuando los explantes enraizados fueron aclimatizados in vivo en 1 suelo: 1 perlita: 1 turba. Se almacenaron con éxito brotes de S.

  rebaudiana in vitro hasta 32 semanas a 24 ± 2°C, en medio MS suplementado con una concentración apropiada de sacarosa, sorbitol o manitol. Después de 32 semanas, el 93,6% de los brotes fueron capaces de sobrevivir y el 89,3% fueron capaces de rebrotar cuando se almacenaron bajo condiciones de luz. Se logró con éxito (65,6% rebrotes) la criopreservación por vitrificación cuando los ápices se pre-cultivaron durante 2 días en un medio suplementado con sorbitol 0,4 M, y a continuación con una solución de vitrificación de la planta 2 (PVS2) al 80% durante 20 minutos, seguido de una deshidratación con PVS2 al 100% durante 60 min a 0°C antes de su almacenamiento en nitrógeno líquido. Este procedimiento es fácil de ejecutar y puede ser útil para el almacenamiento a largo plazo del germoplasma de S. rebaudiana.

• English

  Successful clonal propagation of Stevia rebaudiana was achieved using microshoots as a primary step for in vitro conservation. Maximum proliferation was obtained on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 1.5 mg L�1 benzyl amino purine and 0.2 mg L�1 indole-3-butyric-acid (IBA). Auxin increased rooting percentage of shoots at concentration of 0.4 mg L�1 IBA, indole-3-acetic-acid or naphthalene acetic acid and no rooting occurred without plant growth regulator. A survival of 90% was achieved when rooted explants were acclimatized in vivo in 1 soil: 1 perlite:

  1 peat. In vitro S. rebaudiana shoots were successfully stored for up to 32 weeks on MS medium supplemented with an appropriate concentration of sucrose, sorbitol or mannitol, at 24 ± 2°C. After 32 weeks, 93.6% of the shoots were able to survive. Moreover, 89.3% of them were able to regrow when stored under light conditions. Cryopreservation by vitrification was successfully achieved (65.6% regrowth) when shoot tips were precultured on a medium supplemented with 0.4 M sorbitol for 2 d, followed by loading shoot tips with 80% concentrated plant vitrification solution 2 (PVS2) for 20 min; then dehydrated with 100% PVS2 for 60 min at 0°C prior to storage in liquid nitrogen.

  This procedure is easy to handle and produced a high levels of shoot formation. This protocol could be useful for longterm storage of S. rebaudiana germplasm.