Resumen de La megalina es el receptor para la endocitosis mediada por caveolas de la albúmina y se requiere para la síntesis del factor neurotrófico ácido oleico

André Fabio Bento Abreu, Alfonso Velasco Martín, María Aránzazu Tabernero Urbieta, José María Medina Jiménez

• español

  Objetivo: Estudiar el mecanismo de endocitosis de la albúmina en astrocitos de rata en cultivo primario.

  Material y Métodos: Se utilizaron neonatos (1 día de vida) de ratas Wistar para obtener astrocitos en cultivo primario. Los astrocitos se incubaron con albúmina al 2% o albúmina-FITC al 0,5%, durante 20 minutos, a 4ºC para los estudios de unión y durante 20 minutos a 4ºC, seguido de 10 minutos a 37ºC, para los estudios de internalización. Para los experimentos de pérdida de función, los astrocitos se transfectaron con 50nM de siRNA específico para el silenciamiento de la proteína diana durante 72 h. El ácido oleico presente en el medio de cultivo de astrocitos incubados con albúmina al 2% durante una hora se cuantifico por HPLC.

  Resultados: la megalina y la caveolina-1, pero no la clatrina, colocalizan con la albúmina en la membrana plasmática. El silenciamiento de la megalina y de la caveolina-1 reduce la capacidad de la albúmina para unirse a la membrana e internalizarse y reduce la capacidad de los astrocitos para sintetizar el factor neurotrófico ácido oleico. El silenciamiento de la clatrina no modifica la internalización de la albúmina ni la síntesis del ácido oleico.

  Conclusiones: la albúmina se internaliza mediante endocitosis dependiente de caveolas vía megalina en los astrocitos y que este proceso se requiere para la síntesis del factor neurotrófico ácido oleico

• English

  Aim: Study of the endocytic pathway of albumin in rat astrocytes from primary culture.

  Material y Methods: One day postnatal Wistar rats were used to obtain astrocytes form primary culture. Astrocytes were incubated with 2% albumin or 0.5% FITC-albumin during 20 minutes at 4ºC for binding experiments or during 20 minutes at 4ºC followed by 10 minutes at 37ºC for internalization experiments. For lossof- function experiments, astrocytes were transfected during 72h with 50 nM of siRNA specific for target protein, followed by the binding and internalization experiments. Oleic acid present in the culture medium of astrocytes incubated with 2% albumin during one hour was quantified by HPLC.

  Results: We observed that megalin and caveolin-1, but not clathrin, co-localize with albumin in the membrane. Megalin and caveolin-1 silencing by siRNA reduces albumin binding and internalization, as well as oleic acid synthesis in astrocytes. Nonetheless, clathrin silencing do not modify albumin internalization or oleic acid synthesis in astrocytes Conclusions: albumin is internalized in a caveola-dependent mechanism via megalin and that this event is required for the synthesis of the neurotrophic factor oleic acid