Aplicación de métodos moleculares para la identificación de las especies del complejo Mycobacterium tuberculosis

• Autores: Laura Herrera León, Rodolfo Pozuelo Díaz, Tamara Molina Moreno, Azucena Valverde Cobacho, Pilar Saiz Vega, Mª Soledad Jiménez-Pajares
• Localización: Enfermedades infecciosas y microbiología clínica, ISSN 0213-005X, Vol. 27, Nº. 9, 2009, págs. 496-502
• Idioma: español
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• Resumen

  • Introducción En el complejo Mycobacterium tuberculosis se engloban las especies M. tuberculosis, Mycobacterium africanum, Mycobacterium bovis, Mycobacterium bovis-Calmette y Guérin, Mycobacterium microti, Mycobacterium caprae, Mycobacterium pinnipedii y Mycobacterium canettii. Estas especies son las causantes de la tuberculosis en humanos y animales. Tradicionalmente la identificación de estas especies se ha basado en el estudio de métodos fenotípicos. No obstante, en los últimos años se han desarrollado numerosas técnicas moleculares. El objetivo de este trabajo es la evaluación de cada una de éstas para crear un esquema de identificación rápido y sencillo.

    Material y métodos Mediante el esquema propuesto se analizaron 251 cepas escogidas al azar entre las estudiadas en el año 2004 y se analizaron 797 cepas recibidas en el Laboratorio de Referencia de Micobacterias entre los años 2005 y 2007. La caracterización fenotípica de 4.183 cepas aisladas en este período se realizó mediante el estudio morfológico de la colonia, el aspecto del cultivo, la reducción de nitratos, la producción de niacina y el crecimiento en presencia de 10µg/ml de isoniacida del ácido 2-tiofencarboxílico y 50µg/ml de pirazinamida. El esquema de identificación diseñado consiste en lo siguiente: 1) PCR (polymerase chain reaction �reacción en cadena de la polimerasa�)-RFLP (restriction fragment length polymorphism �polimorfismo del ácido desoxirribonucleico�) del gen gyrB y digestión con las enzimas RsaI, TaqI o Sac II y PCR-RFLP del gen hsp65 y digestión con la enzima HhaI, y 2) PCR multicebador para detectar la ausencia o la presencia de las regiones RD9 y RD1.

    Resultados Los resultados obtenidos muestran una concordancia del 100% entre el esquema fenotípico y el esquema molecular.

    Conclusión Este esquema de identificación es un método rápido y sencillo basado en técnicas moleculares que puede implantarse en la mayoría de los laboratorios a un bajo coste y con un 100% de sensibilidad y de especificidad.