Análisis de la expresión de 4 micro-ARN en espermatozoides y su implicación en la fertilidad masculina

• Autores: Albert Salas-Huetos, Joan Blanco, Francesca Vidal Domínguez, Ester Antón
• Localización: Revista internacional de Andrología: salud sexual y reproductiva, ISSN-e 1698-031X, Vol. 10, Nº. 3, 2012, págs. 92-97
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Analysis of the expression of four microRNAs in spermatozoa and their role in male fertility
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• Resumen
  • español

    Introducción: Los micro-ARN (mi-ARN) son moléculas de 22�24 nucleótidos implicadas en la regulación de la expresión génica de numerosos procesos. Recientemente, se han identificado perfiles alterados de expresión de mi-ARN en diferentes casos de infertilidad idiopática, sugiriendo un papel relevante de estas moléculas en la regulación de la fertilidad.

    Objetivo: Caracterizar los patrones de expresión de 4 mi-ARN en ácido ribonucleico espermático procedente de individuos fértiles e infértiles.

    Material y métodos: Se obtuvo la fracción espermática de 4 muestras de semen de individuos fértiles y 4 muestras de individuos que consultaban por infertilidad. Se aisló el ácido ribonucleico utilizando el método TRIzol® y seguidamente se efectuó un tratamiento con DNasa. La ausencia de ácido desoxirribonucleico en las muestras extraídas se confirmó mediante una reacción en cadena de la polimerasa para el gen de la protamina 1. Seguidamente, con cebadores específicos para los mi-ARN hsa-miR-23a, hsa-miR-744, hsa-let-7f y hsa-miR-1, y el normalizador Mamm-U6, se realizaron reacciones en cadena de la polimerasa a tiempo real mediante tecnología TaqMan. La cuantificación de las diferencias de expresión se realizó mediante el cálculo del estadístico Fold Change y la utilización de un intervalo de confianza del 95%.

    Resultados: Para cada individuo, se obtuvo una media de 2,6 × 10-5 ng de ácido ribonucleico/espermatozoide con una pureza de 1,72 (± 0,05) y sin trazas de ácido desoxirribonucleico. El análisis TaqMan reveló la presencia de hsa-miR-23a, hsa-miR-744 y hsa-let-7f en los espermatozoides de todos los individuos estudiados. La expresión de hsa-let-7f mostró una reducción significativa en 3 de los 4 individuos problema respecto a los individuos control.

    Conclusión: Los espermatozoides humanos contienen los mi-ARN hsa-miR-23a, hsa-miR-744 y hsa-let-7f. Este último muestra una reducción significativa de expresión en 3 de los 4 individuos infértiles analizados sugiriendo la implicación de alteraciones en la expresión de mi-ARN como causa subyacente de algunos casos de infertilidad masculina.

  • English

    Introduction: MicroRNAs (miRNAs) are 22�24 nt molecules involved in the gene expression regulation of many biological processes. Several authors have recently identified altered miRNA expression profiles in cases of male idiopathic infertility, suggesting its fundamental role in fertility regulation.

    Objective: To characterize the expression of four miRNAs in sperm ribonucleic acid from fertile and infertile men.

    Material and methods: Four ejaculated samples from fertile donors and four samples from idiopathic infertile patients were obtained. Total RNA was isolated using the TRIzol method followed by a DNase treatment. To confirm proper ribonucleic acid purification, a polymerase chain reaction for the Protamine-1 gene (PRM-1) was performed. Afterwards, real-time polymerase chain reaction with specific primers for the miRNAs hsa-miR-23a, hsa-miR-744, hsa-let-7f and hsa-miR-1, together with the normalization control Mamm-U6, were performed. Differences in expression were quantified by the Fold-Change statistic and 95% confidence intervals.

    Results: For each individual, an average of 2.6 × 10-5 ng ribonucleic acid/spermatozoa was obtained, with a purity of 1.72 (±0.05) and no traces of deoxyribonucleic acid. TaqMan analysis confirmed the presence of hsa-miR-23a, hsa-miR-744 y hsa-let-7f in all the samples. The expression of hsa-let-7f was significantly lower in three of the four samples from men with idiopathic infertility.

    Conclusion: Human spermatozoa contain the miRNAs hsa-miR-23a, hsa-miR-744 and hsa-let-7f. Hsa-let-7f expression was significantly reduced in three out of four infertile patients, suggesting the involvement of alterations in miRNA expression as the underlying cause of some cases of male infertility.