Diseño de un genosensor electroquímico para la detección indirecta de gluten en alimentos

• Autores: Begoña Martín Fernández, Carmen Lorena Manzanares Palenzuela, Marta Sánchez-Paniagua López, Beatriz López Ruiz, Gloria Frutos Cabanillas
• Localización: Anales de la Real Academia Nacional de Farmacia, ISSN-e 1697-4298, ISSN 0034-0618, Nº. 3, 2012, págs. 323-343
• Idioma: español
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• Resumen

  • Se propone un nuevo genosensor electroquímico para la detección de una secuencia específica de ADN que codifica un fragmento inmunogénico de la a-2-gliadina, proteína del gluten de trigo responsable de la celiaquía.. El diseño del genosensor se basa en la formación de una monocapa autoensamblada de sonda de captura y un agente bloqueante, mercaptohexanol, sobre electrodos de oro serigrafiados. Se eligió un ensayo tipo sándwich, utilizando una sonda indicadora marcada con biotina y el conjugado estreptavidina-fosfatasa alcalina como molécula de marcaje. La detección del analito se basó en la medida de la corriente de oxidación del 1-naftol, producto formado por la hidrólisis enzimática del 1-naftil-fosfato, mediante voltamperometría de pulso diferencial. Se investigaron y optimizaron los parámetros implicados en la composición de la fase sensora mediante voltametría cíclica, encontrándose como relación óptima sonda de captura:mercaptohexanol 2 µM:9 mM. Con el objetivo de minimizar las adsorciones inespecíficas, se optimizaron las concentraciones de sonda indicadora y conjugado enzima-estreptavidina, especies involucradas en la fase de medida, obteniéndose como valores óptimos 1 µM and 1,075x10-3 g/L respectivamente. El genosensor propuesto presentó una respuesta lineal entre 20 y 250 nM.