Cuantificación de bacterias cultivables mediante el método de "Goteo en Placa por Sellado (o estampado) Masivo"

• Autores: Andrés Corral Lugo, Yolanda Elizabeth Morales García, Laura Abisaí Pazos Rojas, Araceli Ramírez Valverde, Rebeca Débora Martínez Contreras, Jesús Muñoz Rojas
• Localización: Revista Colombiana de Biotecnología, ISSN 0123-3475, ISSN-e 1909-8758, Vol. 14, Nº. 2, 2012, págs. 147-156
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Quantification of cultivable bacteria by the "·Massive Stamping Drop Plate" method
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• Resumen
  • español

    Cuando se desea cuantificar el numero de bacterias presentes en multiples muestras, los procedimientos de rutina suelen consumir mucho tiempo. En ese periodo las muestras podrian sufrir modificaciones en su poblacion. En el presente trabajo se evaluo una metodologia alternativa para cuantificar bacterias cultivables de forma masiva, rapida y economica en la que se implica el sellado, estampado o impresion de diluciones seriadas de muestras de diversa procedencia. El tiempo requerido para preparar 22 muestras para su sellado en placa es de 15 minutos. El metodo se baso en realizar diluciones seriadas (base 10) de las muestras liquidas originales contenidas en una placa multipozos con la ayuda de una pipeta multicanal. Despues, con un replicador se tomo un volumen (aproximadamente 1,65 Êl) de muestra de cada pozo, que se inoculo por sellado en un medio de crecimiento gelificado de interes. Las placas se incubaron el tiempo necesario, se conto el numero de colonias presentes en la dilucion contable y se calculo el numero de Unidades Formadoras de Colonia por mililitro (UFC/ml) para cada muestra. La metodologia se denomino "Goteo por Sellado en Placa Masivo" (GSPM) y ha sido aplicada para cuantificar exitosamente bacterias provenientes de diferentes muestras de laboratorio, por ejemplo, de cultivos liquidos, muestras clinicas (como exudados y secreciones) y bacterias presentes en la rizosfera de plantas de maiz. Sin embargo, la metodologia GSPM podria aplicarse para contabilizar masivamente a bacterias de cualquier otra procedencia.

  • English

    In an attempt to quantify the number of bacteria present in a high number of samples, routine procedures are usually very time-consuming. During this period of time, bacterial population could be modified. In this work, an alternative for a massive, quick and economic method was evaluated in order to count viable bacteria, consisting in the sealing or stamping of serial dilutions performed in samples from different origins. The time required to prepare 22 samples for plate stamping is only 15 minutes. The quantification was based in performing serial dilutions (10-fold) of the original liquid samples contained in a multiwell plate using a multichannel micropipette. Afterwards, using a replicator, the same volume of each sample (approximately 1,65 ìl) was recovered from each well, and then it was inoculated and sealed in a solid growth media of interest. Plates were incubated as needed, colonies were counted in the quantifiable dilution and Colony Forming Units per milliliter (CFU/ml) was calculated for each sample. We called this method "Massive Stamping Drop Plate" (MSDP) and it has been successfully applied to count bacteria from different lab samples, including liquid cultures, clinical samples (exudates and secretions) and bacteria recovered from the rhizosphere of corn plants. However, MSDP could also be applied to massively count bacteria from any other source.