Resumen de Purificación Parcial y Caracterización de Alfa Amilasa de granos germinados de Chenopodium quinoa (Quinua).
Melissa Bedón Gómez, Óscar Nolasco Cárdenas, Carlos Santa Cruz Carpio, Ana Gutiérrez Román
- español
Las alfa amilasas son las enzimas mas estudiadas e importantes en el campo biotecnologico e industrial; ya que han reemplazado por completo la hidrolisis quimica del almidon. Estas enzimas son imprescindibles en la elaboracion de productos alimenticios, combustibles, medicamentos y detergentes con la finalidad de optimizar procesos y conservar el medio ambiente. La amilasa puede ser purificada de diferentes organismos como plantas, animales, hongos y bacterias; actualmente un gran numero de amilasas bacterianas en especial del genero Bacillus estan disponibles comercialmente y son las mas utilizadas en las industrias. Sin embargo, la produccion de estas no satisfacen los requerimientos industriales en el mundo; ya que, la demanda de esta enzima se ha incrementado en los ultimos dos anos y el empleo de amilasas bacterianas ha provocado alergias afectando al 15% de la poblacion a nivel mundial. En este estudio, como fuente de amilasa se emplearon semillas de Chenopodium quinoa (quinua) var hualhuas blanca durante el proceso de germinacion; esta enzima fue parcialmente purificada por precipitacion con sulfato de amonio obteniendo una actividad especifica final de 35.60U/mg y un grado de purificacion de 5 veces. La purificacion fue confirmada por SDS-PAGE, encontrando un peso molecular de 44kDa. La actividad enzimatica se evaluo mediante el metodo de Miller mostrando maxima actividad a pH 7 y a temperatura de 37oC. La linealizacion de Lineweaver-Burk nos dio un Km de 16mg/mL y Vmax de 100 ÊM de maltosa/min. Por lo tanto, esta caracterizacion reune los pre-requisitos necesarios para la aplicacion en la industria.
- English
The alpha amylases are the enzymes most studied and important in biotechnology and industry; because they have completely replaced the starch fs chemical hydrolysis. These enzymes are essential in the food production, medicines and detergents in order to optimize processes and conserve the environment. The amylase can be isolated from different organisms such as plants, animals, fungi and bacteria, now a large number of bacterial amylases especially from genus Bacillus are commercially available and they are the most used in industry. However, the production of these do not meet industry requirements in the world, because the demand for this enzyme has increased in the last two years and the use of bacterial amilase has caused allergies affecting the 15% of the global population. In this study, as a source of amylase used the seeds from Chenopodium quinoa (quinoa). Var. white hualhuas during the germination process, this enzyme was partially purified by ammonium sulfate precipitation to obtain a final specific activity of 35.60U/mg, and a grade of purification of 5 times. The purification was confirmed by SDS-PAGE, where the molecular weight was 44kDa. The enzyme activity was evaluated by Miller method showing maximum activity at pH 7 and 37oC. The Lineweaver-Burk linearization shows a Km of 16mg/mL and Vmax of 100 ÊM the maltose / min. Therefore, these characterization meet the prerequisites need for industry.
