El presente estudio describe la evaluación de la infección in vitro de Leishmania chagasi en una línea celular Lulo, derivada de tejidos embrionarios de Lutzomyia longipalpis, teniendo en cuenta variables ambientales y fisicoquímicas. El medio Grace/L-15, suplementado con 5% de Suero Fetal Bovino (SFB), fue utilizado para el mantenimiento de la línea celular Lulo. La cepa CL044B/84 de Leishmania chagasi se empleó en la infección de las células. Las variables fisicoquímicas del medio de cultivo tenidas en cuenta para los ensayos experimentales de la infección celular fueron: concentración de SFB (5%, 10%, 15% y 20%), ausencia y presencia de hemolinfa, pH (5.0, 5.5, 6.0, 6.5 y 6.8) y osmolalidad (350 mOsm/kg, 400 mOsm/kg y 450 mOsm/kg); también se evalúo la temperatura a la cual fueron incubadas las células infectadas (28°C, 32°C y 37°C). Cajasde cultivos estériles de 24 pozos, conteniendo laminillas de 12 mm de diámetro al interior de cada uno de ellos, se usaron como sustrato de las células infectadas; éstas se retiraron a los 3, 6 y 9 días postinfección. El mayor porcentaje de infección (33,3%) se alcanzó al 5% de SFB, a pH de 6,8, osmolalidad de 320 mOsm/Kg y a una temperatura de incubación de 26°C, sin atmósfera de C02. La selección de estas óptimas condiciones fisicoquímicas y ambientales en el proceso infectivo del parásito al interactuar con las células Lulo, permitió alcanzar niveles relativamente altos de infección, los cuales serán útiles en estudios básicos y aplicados, en la perspectiva de contribuir al control de la leishmaniasis.
The following research describes the evaluation in the in vitro infection by Leishmania (L.) chagasi in a Lulo cell line, resulting from Lutzomyia longipalpis embryonic tissue, taking into account physicochemical and environmental variables. The medium Gracel/L-15, containing 5% Fetal Bovine Serum (FBS), was used to maintain the cell strain Lulo. The infection process was performed by using Leishmania chagasi CLO44B/84 strain. The physicochemical variables of the growing medium evaluated for the experimental tests of the cell infection were: concentration of FBS (5%, 10%, 15%, and 20%), presence and absence of hemolinfa, pH (5.0, 5.5, 6.0, 6.5, and 6.8) and osmolality (350, 400 y 450 mOsm/kg). In addition, the temperature which the infected cells were incubated (26°C, 32°C and 37°C) was also evaluated. As substrate for the infected cells, glass cover-slips of 12 mm of diameter in 24 well plates were used. The cover-slips with attached infected cells were removed after 3, 6, and 9 days post-infection. The Experimental observations showed that the greatest percentage of infection (33.3%), was obtained at the 5% FBS level, osmolality of 320 mOsm/Kg, a pH of 6.8 and an optimum temperature of 26°C. By selecting these parameters, high levels of infection were reached and these results will certainly be of great use in future studies and applications of the interaction vector-parasite-cells, in the perspective to contribute with leishmaniasis control.
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