Utilización del azul tripán para diferenciar ovocitos bovinos vivos y muertos en fertilización in vitro

• Filipiak, Y. ^[1] ; Larocca, C. ^[1]
  1. [1] Biotecnología de la Reproducción. Facultad de Veterinaria. UdelaR. Montevideo. Uruguay
• Localización: Archivos de zootecnia, ISSN-e 1885-4494, ISSN 0004-0592, Vol. 61, Nº 234, 2012, págs. 309-312
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Use of trypan blue to determine viability of bovine oocytes for in vitro fertilization
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• Resumen
  • español

    Se estudió la tinción supravital con azul tripán (AT) para diferenciar ovocitos inmaduros bovinos vivos y muertos. Es importante conocer la viabili- dad de los ovocitos para descartar los muertos antes de la fertilización in vitro (FIV). Se puncionaron folículos menores de 6 mm de ovarios provenientes de matadero. Los complejos cúmulo ovocitos (COC), se clasificaron en A, B y C. Se consideraron los de calidad A y B. Se formaron 2 estratos (otoño-invierno y primavera-verano) y 4 grupos dentro de cada estrato: un grupo control (GC), el cual no se sometió al AT y tres grupos: G1, G2, G3 que se sometieron al AT por 2, 5 y 10 minutos, respectivamente. Los COC teñidos de azul (muertos), se descartaron, los vivos se cultivaron 22 h para maduración y se volvieron a someter al AT, respetando los mismos tiempos de exposición. Se realizó la inseminación y se contro- ló el desarrollo hasta mórulas compactas para evaluar la posible incidencia del AT y de las estaciones del año. En conclusión, la tinción con AT hasta 10 minutos, es útil para diferenciar ovocitos vivos y muertos sin producir efectos deletéreos.

  • English

    The supravital stain with tripan blue (AT) was used for differentiating live bovine immature oocytes from dead ones. It is important to know the viability of the oocytes, in order to discard the dead ones before the in vitro fertilization (FIV). Smaller than 6 mm follicles were punctured, from ovaries obtained from an abattoir. The cumulus oocyte complexes (COC) were classified as A, B or C.

    Only those of quality A or B were taken into account. Two categories were formed (autumn- winter and spring-summer) and 4 groups within each category were considered: a control group (CG), which was not stained with AT and three groups: G1, G2 and G3 stained with AT for 2, 5 and 10 minutes, respectively. Blue stained COC (dead) were discarded, live COC were cultured for 22 h in a maturation culture and were stained again, maintaining the same exposure times. Insemination was then performed and compact morules counted, in order to evaluate the efect of AT and season.

    In conclusion, AT stain can be used up to 10 minutes to differentiate live and dead oocytes, without any deleterious effect on the gametes.