Resumen de Desarrollo de un inmuno-ensayo enzimático (ELISA) para el diagnóstico de paratuberculosis en bovinos

Adriana Guadalupe Martínez Covarrubias, Marco A. Santillán Flores, Claudia Celic Guzmán Ruiz, Lucía del Carmen Favila Humara, Dionisio Córdova López, Efrén Díaz Aparicio, Laura Hernández Andrade, Miguel Blanco

• español

  Los objetivos del trabajo fueron estandarizar y desarrollar un ELISA con antígeno protoplasmático obtenido de una cepa de Mycobacterium avium paratuberculosis (Map) 3065 de origen ovino, para el diagnóstico de paratuberculosis en bovinos. El antígeno se fijó en las placas a concentraciones de 10, 5, 2.5 y 1.25 μg/100 μl y se probaron diluciones de los sueros control positivo y negativo de 1:20, 1:40, 1:80 y 1:160. El punto de corte se estableció con un intervalo de confianza del 95 % y dos desviaciones estándar. Para determinar la sensibilidad y especificidad del ELISA se trabajó con 491 sueros de bovinos, así como también, se colectaron muestras de heces para efectuar el aislamiento bacteriológico, y la prueba de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) anidada para la detección de Map. Los resultados de las tres pruebas fueron analizadas para determinar la asociación o concordancia por medio de una prueba de Kappa La concentración de antígeno y suero que dieron mejor diferencia entre los controles fue de 1.25 μg/100 μl antígeno y la dilución del suero 1:160, el punto de corte se estableció a una densidad óptica de 0.196; la sensibilidad que se obtuvo fue 79.31 %, la especificidad 82.25 % y el índice de concordancia de 0.2763 del ELISA con respecto al cultivo. Los resultados obtenidos permiten recomendar el ELISA con antígeno protoplasmático de la cepa de Map 3065, como una alternativa para el diagnóstico de la paratuberculosis en bovinos.

• English

  The objective of this study was to standardize and develop an ELISA with protoplasmatic antigen from a Mycobacterium avium paratuberculosis (Map) 3065 strain obtained from sheep, to be used for the diagnosis of bovine paratuberculosis. The antigen was set on plates at 10, 5, 2.5 and 1.25 μg/100 μl concentrations and 1:20, 1:40, 1:80 and 1:160 dilutions of positive and negative control sera were tested. The cutoff point was established with a confidence interval of 95% and two standard deviations. Four-hundred and ninety-one bovine sera were used to establish sensitivity and specificity of the ELISA; likewise feces samples were collected for bacteriological isolation and the nested polymerase chain reaction test (PCR) was applied for Map detection. Results of the three tests were analyzed by kappa test to determine association or concordance. Antigen and sera concentration that gave the best difference between controls was 1.25 μg/100 μl antigen and 1:160 serum dilution, cutoff point was established at an optic density of 0.196; obtained sensitivity was 79.31 %, while specificity was 82.25 % and concordance index of the ELISA was 0.2763 as compared to the culture. Results obtained by ELISA with protoplasmatic antigen of the Map 3065 strain make the recommendation of this assay appropriate as an alternative for the diagnosis of bovine paratuberculosis.