Estudio funcional del promotor del gen NPC1L1
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Beatriz Martín [1] ; María Solanas [2] ; Sandra Pampín [3] ; José-Carlos Rodríguez-Rey [3] ; Fernando Civeira [2] ; Miguel Pocoví [1]
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[1] Universidad de Zaragoza
Universidad de Zaragoza
Zaragoza, España
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[2] Hospital Miguel Servet
Hospital Miguel Servet
Zaragoza, España
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[3] Universidad de Cantabria
Universidad de Cantabria
Santander, España
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- Localización: Clínica e investigación en arteriosclerosis, ISSN 0214-9168, ISSN-e 1578-1879, Vol. 20, Nº. 5, 2008, págs. 183-189
- Idioma: español
- Títulos paralelos:
- Functional analysis of the NPC1L1 gene promoter
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Resumen
- español
Introducción En la absorción intestinal de colesterol intervienen distintos transportadores, uno de gran importancia y diana del fármaco ezetimiba, la proteína NPC1L1. Se ha demostrado una asociación entre distintas variantes genéticas de NPC1L1, la eficiencia en la absorción de esteroles y la concentración plasmática de colesterol unido a lipoproteínas de baja densidad. El objetivo de este estudio fue identificar y analizar el efecto funcional de los polimorfismos genéticos potencialmente más relevantes del gen NPC1L1 sobre su actividad transcripcional.
Material y métodos Como zona de estudio se seleccionó 2 kb de la región promotora del gen NPC1L1. Se realizó una búsqueda en bases de datos para localizar variantes descritas en las secuencias seleccionadas. Se diseñaron 3 fragmentos, que se amplificaron mediante PCR y posteriormente se secuenciaron. La funcionalidad del polimorfismo −133A>G se determinó mediante ensayos de retardo en gel y medida de la actividad luciferasa.
Resultados El análisis de la zona promotora de 102 sujetos normolipidémicos mostró 5 nuevas variantes polimórficas (−1485C>T, −1425C>G, −982G>C, −292T>C y −18C>A) no identificadas previamente. Los resultados de los ensayos de retardo en gel con el polimorfismo −133A>G revelaron mayor afinidad de unión de las proteínas nucleares con la sonda portadora de la variante −133A. Por otra parte, la actividad del promotor de NPC1L1 con la variante −133G mostró un aumento de 2,5 veces respecto a la variante −133A.
Conclusión Nuestros resultados demuestran que hay diferencias en la afinidad de unión y actividad transcripcional de NPC1L1 en función del polimorfismo −133A>G. Esta variante génica podría contribuir a la variabilidad interindividual de la absorción intestinal de esteroles.
- English
Introduction Cholesterol absorption is a process which involves the participation of numerous transporters. One of these transporters is NPC1L1, identified as a critical protein for intestinal cholesterol absorption and the molecular target of ezetimibe. It has been shown that NPC1L1 variants are associated with variations in sterol absorption and plasma levels of LDL-C. The aim of this work was to identify and analyse the potential functional effect on the transcriptional activity of NPC1L1 gene polymorphisms.
Material and methods The previously described NPC1L1 promoter variants were located by means of SNP database search. The NPC1L1 promoter was analysed by three PCR reactions followed by automatic capillary sequencing. Functional study of the −133A>G polymorphism was performed by EMSA and Luciferase assays.
Results NPC1L1 promoter analysis in 102 normolipemic subjects showed five novel polymorphisms (−1485C>T, −1425C>G, −982G>C, −292T>C y −18C>A). EMSA results revealed that the -133A specific oligonucleotide produced a stronger retarded band than the retarded band corresponding to the −133G allele. Luciferase activity observed with −133G NPC1L1 variant was 2.5-fold higher than that seen with the −133A variant.
Conclusion Our results reveal that the −133A>G polymorphism exerts a significant effect on nuclear extract binding affinity and NPC1L1 transcriptional activity. This gene variant could contribute to interindividual variability of intestinal sterols absorption.
- español
