Optimización de un protocolo para aislamiento de DNA de hojas de "Saccharum officinarum".

• Autores: Manuel de Jesús Bermúdez Guzmán, Salvador Guzmán González, Mario Orozco Santos, José Joaquín Velázquez Monreal, Marco Tulio Buenrostro Nava, Claudia Yared Michel López
• Localización: Revista mexicana de ciencias agrícolas, ISSN 2007-0934, ISSN-e 2007-9230, Vol. 7, Nº. 4, 2016, págs. 897-910
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Optimizing a protocol for DNA isolation of leaf "Saccharum officinarum".
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• Resumen
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    La extracción de DNA libre de polisacáridos, polifenoles, proteínas y RNA de plantas constituye el paso inicial para diversos estudios en Biología molecular. Existen diversos métodos de extracción de DNA específicos para caña de azúcar (Saccharum officinarum), sin embargo, consumen mucho tiempo y utilizan reactivos y equipos costosos. El objetivo del presente estudio fue optimizar un protocolo rápido, eficiente y de bajo costo para extraer DNA de hojas de S. officinarum. Las variables evaluadas fueron rendimiento, pureza, integridad y funcionalidad del DNA purificado de hojas de caña de azúcar de 6 meses de edad. Se utilizaron técnicas de espectrofotometría, electroforesis en geles de agarosa y marcadores moleculares para evaluar las variables anteriores. Las variables rendimiento (mg/g) y pureza (A260:280 y A260:230) del DNA extraído mostraron diferencias altamente significativas (p˃ 0.05) con el protocolo I. Los mejores resultados se obtuvieron con la interacción del protocolo I +N2, con un rendimiento de DNA de 1.17 mg/g y purezas de 1.95 y 1.91 (A260:280 y A260:230). La funcionalidad del DNA por amplificación por PCR con los marcadores RAPD y TRAP generaron perfiles de bandas nítidas de buena calidad y de fácil interpretación. Se recomienda el uso del protocolo I +N2 para la extracción de DNA de S. officinarum para obtener elevados rendimientos de DNA con calidad y pureza óptima para aplicaciones de marcadores moleculares

  • English

    The DNA extraction free polysaccharides, polyphenols, plant protein and RNA is the initial step to several studies in molecular biology. There are various methods of extracting specific DNA of sugar cane (Saccharum officinarum), however, are time consuming and expensive equipment and reagents used. The aim of this study was to optimize a fast, efficient and inexpensive protocol for extracting DNA from leaves of S. officinarum. The variables evaluated were yield, purity, integrity and functionality of DNA purified from leaves of sugarcane 6 months old. Techniques spectrophotometry, agarose gel electrophoresis and molecular markers to evaluate the above variables were used. The performance variables (mg/g) and purity (A260:280 and A260:230) the extracted DNA showed highly significant differences (p˃ 0.05) protocol I. The best results were obtained with the protocol interaction I +N2, DNA yield 1.17 mg/g and 1.95 and 1.91 purities (A260:280 and A260:230). Functionality DNA by PCR amplification with the RAPD markers and TRAP bands sharp profiles generated good quality and easy to interpret. The use of the protocol I+N2 for extracting DNA from S. officinarum to obtain high yields of DNA with optimal quality and purity for applications of molecular markers is recommended.