Effect of induction strategy on the expression of different recombinant protein synthesized in Escherichia coli under the control of tryptophan promoter

• Autores: R. E. Narciandi, M. J. Rivera, D. Rodríguez
• Localización: Afinidad: Revista de química teórica y aplicada, ISSN 0001-9704, Vol. 73, Nº. 576, 2016, págs. 305-309
• Idioma: inglés
• Títulos paralelos:
  • Efecte de l’estratègia d’inducció en l’expressió de diferents proteïnes recombinants sintetitzades en Escherichia coli sota el control del promotor triptòfan
  • Efecto de la estrategia de inducción en la expresión de diferentes proteínas recombinantes sintetizadas en Escherichia coli bajo el control del promotor triptófano
• Enlaces
  • Texto completo
• Resumen
  • español

    Las proteínas gag-24 (VIH-1) y una región representativa de la gp-41 (VIH-1), gp-36 (VIH-2) y gp-120 (VIH-1) fueron expresadas en Escherichia coli bajo control del promotor del triptófano. La influencia de las condiciones de inducción en el crecimiento celular y la expresión de las proteínas fueron evaluadas y tomadas en cuenta para el establecimiento de las condiciones de cultivo final. Se evaluaron diferentes concentraciones de ácido 3-ß Indolacrílico (entre 0 a 60 mg/ml) y triptófano (de 0 a 100 mg/ml) sobre el nivel de crecimiento y de expresión para las cuatro proteínas recombinantes expresadas, utilizando en todos los casos las mismas condiciones (plasmídio, medio de cultivo y condiciones de crecimiento) a nivel de zaranda. El nivel de expresión alcanzado para cada proteína recombinante dependió de las condiciones de inducción. Los resultados sugieren que no existe una regla predeterminada sobre las condiciones de inducción para alcanzar altos niveles de expresión de las proteínas recombinantes expresadas bajo el promotor del triptófano. Finalmente decidimos llevar a cabo la producción de las proteínas por derepresión del sistema de expresión, sin el uso de triptófano en el medio de cultivo. Los niveles de expresión obtenidos con estos clones fueron superiores a 15% para cada una de las proteínas evaluadas. Estos resultados son muy superiores a los reportados previamente para las proteínas del VIH. Estos procedimientos también podrían aplicarse para evaluar la expresión de otras proteínas recombinantes expresada en E. coli bajo el control del promotor triptófano.

  • català

    Les proteïnes gag-24 (VIH-1) i una regió representativa de la gp-41 (VIH-1), gp-36 (VIH-2) i gp-120 (VIH-1) van ser expressades en Escherichia coli sota control del promotor del triptòfan. La influència de les condicions d’inducció en el creixement cel·lular i l’expressió de les proteïnes van ser avaluades i considerades per a l’establiment de les condicions del conreu final. Es van avaluar diferents concentracions d’àcid 3-ß Indolacrílic (entre 0 i 60 mg/ml) i del triptòfan (entre 0 i 100 mg/ml) en relació al nivell de creixement i d’expressió per a les quatre proteïnes recombinants expressades, utilitzant en tots els casos les mateixes condicions (plasmidi, medi de cultiu i condicions de creixement) a nivell de garbell.

    El nivell d’expressió assolit per a cada proteïna recombinant depenia de les condicions d’inducció. Els resultats suggereixen que no hi ha una regla per defecte sobre les condicions d’inducció per assolir alts nivells d’expressió de les proteïnes recombinants expressades sota el promotor del triptòfan. Finalment vam decidir dur a terme la producció de proteïnes per repressió del sistema d’expressió, sense l’ús de triptòfan en el medi de cultiu. Els nivells d’expressió obtinguts amb aquests clons van ser superiors al 15% per a cadascuna de les proteïnes avaluades. Aquests resultats són molt superiors als reportats prèviament per les proteïnes del VIH. Aquests procediments també es podrien aplicar per avaluar l’expressió d’altres proteïnes recombinants expressada en E. coli sota el control del promotor triptòfan.

  • English

    The proteins gag-24 (HIV-1), and a representative region of the gp-41 (HIV-1), gp-36 (HIV-2), and gp-120 (HIV-1) were expressed in Escherichia coli under control of the tryptophan promoter. The influence of the induction conditions on cellular growth and protein expression were evaluated, and taken into account for establishing the final culture conditions. Different concentration of 3-ß Indoleacrylic Acid (IA between 0 to 60 mg/ml) and tryptophan (from 0 to 100 mg/ml) on growth and expression level, was evaluated for the four expressed recombinant proteins, using the same plasmid, culture medium, and growth conditions at shake flasks level. The expression level achieved for each recombinant protein depended on the induction conditions. The results suggest that there is not a predetermined rule about the induction conditions to achieve high level expression of recombinant proteins expressed under tryptophan promoter. Finally we decided to carry out the production of the proteins by derepresion of the expression system, without the use of tryptophan in the cultivation medium. The levels of expression obtained with these clones were higher than 15% for each one of the tested proteins. These results are very superior to those reported previously for the several proteins of the HIV. These procedures could be also applied to evaluate the expression of other recombinant proteins expressed in E. coli under the control of tryptophan promoter.