Detección de cepas de Escherichia coli Shiga Toxigénica (STEC) y enteropatógena (EPEC) basada en PCR multiplex

• Autores: Oscar David Seni Pinoargote
• Localización: La Técnica, ISSN 1390-6895, ISSN-e 2477-8982, Nº. 15, 2015 (Ejemplar dedicado a: Diciembre), págs. 78-89
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Detection of S higa Toxigenic Escherichia coli (STEC) and Enteropathogenic (EPEC) strains based on multiplex PCR
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• Resumen
  • español

    Escherichia coli (STEC) y (EPEC) causan enfermedades gastrointestinales y pertenecen a los serogrupos 0111, 0157 y otros, frente a lo cual se planteó como objetivo implementar la técnica de PCR múltiplex para diagnosticar y caracterizar sus genes de virulencia. Se desarrollaron tres PCR multiplex: en la primera fueron empleados tres pares de iniciadores específicos de  la  región   rfbE (codificante  del  antígeno  O) del serotipo 0157:H7, del gen eaeA que  codifica  la proteína intimina y del gen hIyA codificante de  hemolisina, los cuales generaron productos de 259, 384 y 534 pb. En la segunda PCR se detectaron los genes de la sub-unidad A de las shigatoxinas stx1, stx2, incluidas las variantes de stx2. con amplicones de 180 y 255 pb. En la tercera se utilizaron iniciadores para stx1, stx2, eaeA y hIyA. Se determinó la selectividad de los iniciadores con cepas STEC, ATCC y se detectó hasta 1 UFC, lo cual demuestra su alta sensibilidad. 

  • English

    Escherichia coli (STEC) and (EPEC) cause gastrointestinal diseases. These bacteria belong to the serogroup 0111, 0157 and others. The stated objective is to implement the PCR multiplex technique to diagnose and characterize its virulence genes. Three PCR multiplex were developed; in the first one, three pairs of specific initiators were used from region rfbE (encoding of antigen 0) of serotype 0157:H7, of gen eaeA that encodes the intimin protein and gen hlyA encoding of hemolysin, which generates products of 259, 384 y 534 pb.

    In the second PCR the genes of subunit A of shigatoxins stx1 , stx2 (including variants of stx2 ) were detected, with amplicons of 180 and 255 bp. In the third PCR, initiators to stx1, stx2, eaeA and hlyA were used. The selectivity of initiators with strains STEC, ATCC was determined and it was detected up to 1 UFC, which demonstrates its high sensitivity