Implementación de un múltiplex PCR para el diagnóstico del vibrio cholera, en el control de calidad de camarón de exportación

• Autores: Elvia P. Aspiazu Miranda, Yazmin de las Mercedes Granda Barba, Carmen Mosquera Herrera
• Localización: Dominio de las Ciencias, ISSN-e 2477-8818, Vol. 3, Nº. 4, 1, 2017, págs. 369-380
• Idioma: español
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• Resumen

  • El objetivo del presente trabajo, es implementar la técnica de Multiplex- PCR para el diagnóstico en forma simultánea de los genes de toxina de Vibrio cholera, aislados a partir de muestras de Litopenaeus vannamei, evaluar este diagnóstico en situaciones de control epidemiológico y de control de calidad. Se usaron muestras de bacterias en medio de cultivo sólido y en caldos pre-enriquecidos para evaluar eficiencia mediante comparaciones de protocolos de miniprep de purificación fenol/cloroformo/isoamil alcohol, y método rápido para evitar usar fenol/cloroformo/isoamil alcohol; se emplearon iniciadores específicos de genes marcadores de virulencia, y se optimizaron las condiciones de amplificación de la Simple y Multiplex -PCR para la detección de Vibrio cholera. Se logró optimizar un multiplex PCR para la detección de Vibrio cholera empleando iniciadores para 4 genes de virulencia (ctxA, toxR, tcpA e hlyA) la cual después de optimización es capaz de detectar ctxA e hlyA en las diluciones 10-7 mientras que para los genes toxR y tcpA hasta la dilución 10-8, la cual basada en su sensibilidad se puede sugerir su uso como sistema de monitoreo sensible de productos acuícolas para determinar la inocuidad frente a este patógeno.