Resumen de PCR cuantitativa en tiempo real para la amplificación de ADN de Burkholderia mallei: comparación con el método molecular recomendado por la OIE

María Victoria Ortega García, O. Jiménez Mateo, J. Selles, O. Bassy Álvarez, C. Granja Albarellos, J.C. Cabria Ramos

• español

  Objetivo principal:

  Comparar dos PCRs en tiempo real cuantitativas para la identificación de Burkholderia mallei, en términos de sensibilidad y especificidad analíticas.

  Metodología:

  Amplificación parcial de genes de B. mallei:- orf11 y orf13 del sistema de secreción de tipo III TTS1 del género Burkholderia mediante qPCR con sondas de hibridación. - fliP que codifica para la flagelina P de B. mallei mediante qPCR con sonda TaqMan. Cálculo de parámetros de validez.

  Resultados:

  El ensayo desarrollado en el laboratorio obtuvo un límite de detección del orden del obtenido con el método recomendado por la OIE (70,4 fg/reacción) y permitió la amplificación específica de ADN de B. mallei.

  Conclusión:

  El método desarrollado por el laboratorio de Biología Molecular del INTA permite una rápida amplificación de ADN de B.mallei con unas elevadas sensibilidad y especificidad analíticas. Además, posibilita la diferenciación entre B. mallei y B. pseudomallei.

• English

  Objective:

  Comparison of two quantitative real-time PCRs for identification of Burkholderia mallei, on analytical sensitivity and specificity terms.

  Methods:

  Partial amplification of Burkholderia mallei gene: - orf11 and orf13 targeting the type III secretion TTS1 system cluster from Burkholderia genus by qPCR using hybridisation probes. - fliP targeting flagelin P from B. mallei by qPCR using TaqMan probe.Validity parameters determination.

  Results:

  The duplex assay developed by the Molecular Biology Laboratory at INTA obtained a limit of detection similar than that reached by the molecular method recommended by the OIE and permitted the specific amplification of B. mallei DNA.

  Conclusions:

  The duplex assay developed by the Molecular Biology Laboratory at INTA provides a rapid amplification of B. mallei DNA, also shows high analytical sensitivity and specificity. Furthermore, this assay permits the differentiation between B. mallei and B. pseudomallei.