Resumen de Efecto de la criopreservación y de la blastocelectomía sobre el desarrollo in vitro de embriones bovinos producidos in vivo

Oscar Enrique Zárate-Guevara, Angélica Del R. Gil Magaña, Felipe Montiel Palacios, Rodolfo Canseco-Sedano, Lorena López-de Buen

• español

  La criopreservación (CR) es un procedimiento rutinario en biología, ganadería y medicina, y se logra por curva lenta (CL) y vitrificación (VT). La calidad, el estadio de desarrollo y la técnica de CR alteran la viabilidad de los embriones post-descongelados. La blastocelectomía (Blx) se desarrolló para elevar la tasa de sobrevivencia de embriones criopre - servados. La hipótesis de este estudio fue que el método de CR por vitrificación versus curva lenta alcanza una mayor tasa de eclosión (TE) in vitro de blastocistos bovinos (BB) con o sin blastocelectomía. El objetivo fue determinar la TE in vitro para BB criopreservados por VT versus CL y con o sin Blx. El diseño experimental fue completamente al azar con arreglo factorial 2  2, y los factores fueron la CR y la Blx. En 30 embriones se realizó Blx y otros 30 embriones quedaron intactos; 50 % de cada grupo se criopreservó por CL y 50 % por VT (n  15, por tratamiento). Los embrio - nes criopreservados por CL fueron expuestos a 1.5 M de etilenglicol por 10 a 30 min y congelados a velocidad de 0.5 °C min  1 en una congeladora automática. La VT se rea - lizó introduciendo los embriones en solución de equilibrio por 5 a 15 min, después se pasaron a cuatro gotas de solución de vitrificación y se mantuvieron 5, 5, 10 y 10 s en cada gota, respectivamente; luego se colocaron en Criotops  y se sumergieron en nitrógeno líquido. Después de descongelar y calentar, los blastocistos se cultivaron en medio IVC3  con 10 % de sustituto sintético de suero por 72 h a 38.5 °C, 5 % de CO 2, 5 % de aire y 95 % de humedad. La TE se analizó por el método de  2 para determinar la homogeneidad entre las proporciones de los tratamientos. El efecto de BLX en la tasa de supervivencia y TE in vitro fue no significativo. VT como método de CR de BB producidos in vivo permite tasa de supervivencia mayor y mejor tasa de eclosión post- descongelación que el método de congelación CL.

• English

  Cryopreservation (CR) is a routine procedure in biology, livestock and medicine, and it is achieved with slow curve (CL) and vitrification (VT) procedures. The quality, stage of development and technique of CR alter the viability of post-thawed embryos. Blastocoelectomy (Blx) was developed to increase the survival rate of cryopreserved embryos.

  The hypothesis of this study was that the CR method by vitrification versus slow curve achieves a higher hatching rate (TE) in vitro of bovine blastocysts (BB) with or without blastocoelectomy. The objective was to determine the in vitro TE for BB cryopreserved by VT versus CL and with or without Blx. The experimental design was completely randomized with a 2  2 factorial arrangement, and the factors were CR and Blx. In 30 embryos Blx was performed and 30 other embryos remained intact; 50 % of each group was cryopreserved by CL and 50 % by VT (n  15, per treatment).

  Embryos cryopreserved by CL were exposed to 1.5 M ethylene glycol for 10 to 30 min and frozen at a speed of 0.5 °C min  1 in an automatic freezer. The VT was performed by introducing the embryos in equilibrium solution for 5 to 15 min, then they were transferred to four drops of vitrification solution and kept 5, 5, 10 and 10 s in each drop, respectively; then they were placed in Criotops  and immersed in liquid nitrogen.

  After thawing and heating, the blastocysts were cultured in IVC3  medium with 10 % of synthetic serum substitute for 72 h at 38.5 °C, 5 % CO 2 , 5 % air and 95 % humidity.

  The TE was analyzed by the  2 method to determine the homogeneity between the proportions of the treatments.

  The effect of Blx on the survival rate and TE in vitro was not significant. VT as CR method of BB produced in vivo allows higher survival rate and better post-thawing hatching rate than the CL freezing method.