Resumen de Aproximación al estudio "in vivo" de los mecanismos de transcripción en la retina de la rata
María Dolores Pinazo Durán, I. Azorín Villena, Juan Bautista Salom Sanvalero, Jaime Renau Piqueras, F. J. Iborra
Objetivos: describimos un nuevo método para visualizar y cuantificar la actividad transcripcional en la retina, como alternativa a los métodos autorradiográficos hasta ahhora existentes y que nos ha permitido detectar "in vivo" la síntesis y transporte del ácido ribonucleico (ARN) con una alta resolución (Iborra y cols. J. Cell Science'98). Deducimos dos aplicaciones potenciales: 1) detección de variaciones en la transcripción que pudieran existir durante el desarrollo del sistema visual, y 2) alteraciones en la homeostasis núcleo-citoplasmática del ARN que pudieran relacionarse con procesos oftalmológicos. Métodos: se utilizaron ratas Wistar macho adultas a las que se inyectó vía carotídea una solución 2,5 mM de 5-bromouridina en suero fisiológico (GBrU), sacrificándolas a los 30 minutos para extraer el globo ocular homolateral. Un grupo de ratas controles se obtuvieron mediante inyección de suero fisiológico en vez de la solución de estudio. Unos globos oculares se congelaron y destinaron a técnicas inmunohistoquímicas y otros fueron fijados y procesados para análisis inmunocitoquímico, utilizando en ambos casos como anticuerpo primario el anti bromo deoxi uridina. Resultados: la incorporación de BrU al torrente sanguíneo nos permitió visualizar la actividad transcriptorial en la retina de la rata. La inmunotinción fue heterogénea, correspondiendo el marcado más intenso a las capas nucleares, destacando también la fluorescencia positiva de las células ganglionares. El análisis inmunocitiquímico de estas células mostró la distribución subcelular de la BrU existiendo el 64% en el núcleo frene a un 36% del citoplasma. Conclusiones: todos los datos sugieren que el método es válido para visualizar los lugares de transcripción y el estudio de la homeostasis nucleocitoplasmática del ARN, siendo el comienzo para futuras determinaciones relacionadas con patologías del desarrollo o procesos proliferativos y/o degenerativos de la retina y nervio óptico cuyas basess moleculares aún no han sido establecidas.
