Resumen de Comparación de protocolos de aislamiento de DNA a partir de semilla de soya

Luis Felipe Guzmán Rodríguez, Moisés Alberto Cortés Cruz, Juan Manuel Pichardo González, Ramón I. Arteaga-Garibay

• English

  The low efficiency of some nucleic acid extraction protocols and the high cost of commercial products, derives in the comparison between methods. In the present work three DNA extraction methods were compared from soybean, to obtain nucleic acids of adequate concentration and quality for PCR amplification. The protocols studied included the methods with 1% and 3% CTAB solutions, with1% sarcosine and with phenol/chloroform. The experiments were carried out in the DNA and Genomics laboratory of the National Genetic Resources Center-INIFAP. The yield, purity, integrity and functionality of the obtained nucleic acids were evaluated. In all methods,adequate DNA yieldwas achieved, however, the required purity of the material was only obtained with the phenol/chloroform solution. With the methods of CTAB at 1% and 3% and sarcosine, PCR inhibiting substances were observed, while, with phenol/chloroform, the values of the A260/280ratio were in a range of 1.96 to 2.00 and the A260/230ratio in a range of 1.75 to 2.44, with significant differences (p< 0.0001) with the rest of the methods, in addition, the DNA was of high molecular weight and the rbcLgene was amplified by PCR in all the samples. The use of the phenol/chloroform protocol allowed to obtain from soybean, nucleic acids of adequate concentration and quality for PCR amplification.

• Multiple

  La baja eficiencia de algunos protocolos de extracción de ácidos nucleicos y el alto costo de los productos comerciales, deriva en la comparación entre métodos.En el presente trabajo se compararon tres métodos de extracción de DNA a partirde semilla de soya, para obtener ácidos nucleicosde concentración y calidad adecuadas para amplificación por PCR. Los protocolos estudiados incluyeron los métodos con soluciones de CTAB al 1% y al 3%, con sarcosina al 1% y con fenol/cloroformo. Los experimentos se realizaronen el laboratorio de ADN y Genómicas del Centro Nacional de Recursos Genéticos-INIFAP. Se evaluaron el rendimiento, pureza, integridad y funcionalidad de los ácidos nucleicos obtenidos. En todos los métodos se consiguiórendimiento adecuadode DNA, sin embargo, la pureza requeridadel material solo se obtuvocon lasolución de fenol/cloroformo. Con los métodos de CTAB al 1% y 3% y sarcosina se observaron sustancias contaminantes inhibidoras de PCR, mientras que,con fenol/cloroformo los valores de la relación A260/280estuvieron en un rango de1.96 a 2.00y la relación A260/230en un rango de 1.75 a 2.44,con diferencias significativas (p<0.0001)con el resto de los métodos,además, elDNA fue de alto peso molecular y se obtuvo amplificado del gen rbcLpor PCR en todas las muestras. El uso del protocolo de fenol/cloroformopermitió obtener de semilla de soya, ácidos nucleicos de concentración y calidad adecuadas para amplificación por PCR