Resumen de Metodologías para el análisis de expresión y cuantificación de proteínas conferidas en tejidos de cultivos GM

Abel Alberto Verdugo Fuentes, Luciano Castro-Espinoza, M. A. Gutiérrez Coronado, José Luis Martínez Carrillo

• English

  The Cry toxins of Bacillus thuringiensis(Bt) are used as bioinsecticides in agriculture. Reliable methods are needed to analyze the characteristics that are conferred to genetically modified (GM) plants during their development, before commercialization. The objective of the work was to standardize methodologies for the analysis of the expression of genes and proteins conferred to GM cotton during its different phenological stages in the field. As the main practical application of the study, the standardized methodologies can be used in the characterization of GM crops that are developed and for which it is necessary to carry out their risk analysis. To do this, samples of plant tissue were processed in different phenological stages obtained from GM cotton commercial farms in the Yaqui Valley. In the different tissues, gene and protein expression was quantified by RTq-PCR and Elisa analysis, respectively. The results obtained show variation in the expression of the genes conferred throughout the development of the same variety and between the different sites where the crops were located. The highest levels of expression were identified, as expected, in the early stages of the culture (average values of 8.5 μg g-1for Cry1Ac and 63.1 μg g-1for Cry2Ab) compared with that observed in late or mature stages (mean values 0.05 and 0.3 μg g-1for Cry1Ac and Cry2Ab, respectively). Therefore, it is concluded that the RTq-PCR and ELISA techniques are suitable to evaluate the spatial and temporal expression of genes thatare conferred to GM plants, information required to characterize the exposure to the hazard and to perform the risk analysis.

• Multiple

  Las toxinasCrydeBacillus thuringiensis(Bt) sonutilizadas como bioinsecticidas en la agricultura.Se precisa de métodos confiables que permitan analizar las características que se confieren a las plantas genéticamente modificadas (GM)durante su desarrollo, antes de su comercialización.El objetivo del trabajo fue estandarizar metodologías para el análisis de la expresión de genes y proteínas conferidas al algodonero GM durante sus diferentes etapas fenológicas en campo. Como principal aplicación práctica del estudio realizado, las metodologías estandarizadas sepodrán emplear en la caracterización de cultivos GM que se desarrollen y para los cuales sea necesario realizar su análisis de riesgo. Para ello se procesaron muestras de tejido vegetalen diferentes etapas fenológicasobtenidas de predios comerciales de algodoneroGM en elValle del Yaqui.En los diferentes tejidosse cuantificó la expresión génicay proteica mediante análisisRTq-PCR y Elisa, respectivamente. Los resultados obtenidos muestranvariación enla expresión de los genes conferidos a lo largo del desarrollode la misma variedadyentrelos diferentes sitios donde se ubicaron los cultivos. Los mayores niveles deexpresión se identificaron,como se esperaba,en las etapas tempranasdel cultivo(valores medios de 8.5 μg g-1para Cry1Ac y 63.1 μg g-1para Cry2Ab) comparados con loobservado en etapas tardías o maduras (valores medios de 0.05 y 0.3 μg g-1para Cry1Ac y Cry2Ab, respectivamente). Por lo tanto,se concluye que las técnicas de RTq-PCR y ELISA son adecuadas para evaluar la expresión espacial y temporal de genes que se confieran a plantas GM, información requerida para caracterizar laexposiciónal peligro y poder realizar el análisis de riesgo.