Resumen de Validación analítica de técnicas comerciales para la determinación de haptoglobina, proteína C reactiva y amiloide A sérico en caninos Analytical

S. Martínez-Subiela, José Joaquín Cerón Madrigal

• español

  Los métodos analíticos deben ser validados antes de emplearlos de forma rutinaria en un laboratorio. El objetivo de este trabajo fue validar tres métodos analíticos comerciales usados en nuestro laboratorio para la determinación de haptoglobina (Hp), proteína C reactiva (CRP) y amiloide A sérico (SAA) en muestras de la especie canina con concentraciones bajas y altas de proteínas de fase aguda (PFAs). Los parámetros que se evaluaron para la validación fueron: (1) Precisión, determinada mediante el cálculo de los coeficientes de variación (CVs) intra e interdeterminación. (2) Exactitud, evaluada indirectamente comprobando la linealidad bajo dilución. (3) Límite de detección, determinado como la mínima concentración que puede distinguirse de una muestra de valor 0. Todos los CVs intradeterminación fueron <10%, mostrando buena precisión intradeterminación. Sin embargo, los CVs interdeterminación de CRP y SAA fueron 10%. La dilución de una muestra de suero con elevada concentración de PFAs resultó en una recta con una ecuación de regresión lineal con un valor de R²0,98 en todos los casos, mostrando una buena exactitud. Los límites de detección calculados para cada análisis fueron 0,02 g/L para la Hp, 0,15 mg/L para la CRP y 0,79 mg/L para el SAA. Adicionalmente, todos los métodos permitieron diferenciar animales con procesos inflamatorios o infecciosos de animales sanos. Por lo tanto, los resultados de la validación realizada muestran que los ensayos evaluados pueden ser empleados para la medición rutinaria de estas PFAs en muestras de la especie canina. Sin embargo, sería deseable reducir la elevada imprecisión interdeterminación encontrada para los análisis de CRP y SAA.

• English

  All laboratory tests must be validated before being introduced for patient testing. The objective of this work was to perform the analytical validation of three commercial assays that are being used at our laboratory for the determination of haptoglobin (Hp), C reactive protein (CRP) and serum amyloid A (SAA) in canine samples with low and high concentrations of these acute phase proteins (APPs). The parameters evaluated for the validation of the methods were: (1) Precision, assessed by determination of the within and between-run coefficients of variation (CVs). (2) Inaccuracy, evaluated indirectly by investigating linearity under dilution. (3) Limit of detection, determined as the lowest concentration of the APPs which could be distinguished from a zero sample. All within-run CVs were lower than 10%, however between-run CVs were lower than 10% only for Hp. Dilution of a serum sample with high concentrations of the different APPs resulted in a linear regression equation with correlation coefficient R²0.98 in all cases; so all methods showed a good accuracy. The detection limit of each assay was 0.02 g/L for Hp, 0.15 mg/L for CRP and 0.79 mg/L for SAA. Additionally they differentiate animals with inflammatory or infectious diseases from healthy subjects. Overall results of validation showed that the assays tested can be suitable for the routine measurement of APPs in canine samples, although it would be desirable to reduce the between run imprecision found for CRP and SAA assays.