Extracción de ADN de bacterias conservadas en el banco de cepas de la Universidad Francisco de Paula Santander sede Campos Elíseos

• Suárez Contreras, Liliana Yanet ^[1] ; Yañez Meneses, Luz Francy ^[1]
  1. [1] Universidad Francisco de Paula Santander

     Universidad Francisco de Paula Santander

     Colombia

     
• Localización: Respuestas, ISSN 0122-820X, ISSN-e 2422-5053, Vol. 23, Nº. Extra 1, 2018, págs. 24-28
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Extraction of DNA from bacteria preserved in the strain bank of the Universidad Francisco de Paula Santander head office Campos Elíseos
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    Actualmente, la identificación de bacterias se realiza con técnicas clásicas basadas en caracterización fenotípica a nivelmacroscópico y microscópico, sin embargo, este método no es fiable y no permite conocer la verdadera identidad delmicroorganismo en estudio. Por esta razón es necesario realizar una identificación a nivel molecular que permita conocer conseguridad el género y especie. El objetivo de este trabajo fue estandarizar el método de extracción de ADN para bacterias Gramnegativas y Gram positivas según la caracterización química, que permitió obtener ADN de buena calidad para la amplificaciónde una región específica de interés. Se evaluaron dos métodos de extracción, el protocolo de Wilson y el Kit de extracciónWizzard (Promega), los dos métodos se diferenciaron en la cuantificación por NanoDrop y se visualizaron por medio de unaelectroforesis en gel de agarosa al 0,8% utilizando el intercalante Gel red. Según el protocolo de Wilson solo se obtuvo ADN debacterias Gram negativas de buena calidad, y la relación 260/280 en el nanodrop (1,8-2). Mientras que el Kit de extracciónWizzard permitió obtener ADN para bacterias Gram positivas y negativas. Se obtuvieron mejores concentraciones de ADN conel protocolo de Wilson, por otra parte no fue posible obtener ADN de bacterias Gram positivas siendo para este caso el kitWizzard un método sin limitaciones para extraer ADN de cualquier género de bacteria; a pesar de lo antes mencionado, porcostos es más conveniente el protocolo de Wilson, para extraer las bacterias Gram negativas.

    Palabras Claves: Ácidos nucleicos,Bacillus thurigiensis,E. coli,Microorganismos

  • English

    Currently, the identification of bacteria is done with classical techniques based on the phenotypic characterization at macroscopicand microscopic level, however, this method is not reliable and does not allow knowing the true identity of the microorganismunder study. For this reason it is necessary to carry out an identification at the molecular level that allows us to know withcertainty the genus and species. The objective of this work was to standardize a method of DNA extraction for Gram-negativeand Gram-positive bacteria according to the chemical characterization, which allowed obtaining good quality DNA for theamplification of a specific region of interest. Two extraction methods were evaluated, the Wilson protocol and the Wizzardextraction kit (Promega), the two methods were differentiated in the quantification by NanoDrop and visualized by means of a0.8% agarose gel electrophoresis using the Intercalante Gel red. According to Wilson's protocol, only DNA from Gram negativebacteria of good quality was obtained, and the ratio 260/280 in the nanodrop (1.8-2). While the Wizzard Extraction Kit allowedto obtain DNA for Gram positive and negative bacteria. Better DNA concentrations were obtained with the Wilson protocol, andit was not possible to obtain DNA from Gram positive bacteria. For this case, the Wizzard kit was an unlimited method to extractDNA of any kind, according to the reasons mentioned above, the protocol that reduces costs in the laboratory and is the mostconvenient to extract the DNA from Gram negative bacteria is the one proposed by Wilson.

    Keywords: Nucleic acids,Bacillus thurigiensis,E. coli,Microorganisms