Resumen de Transformación genética del naranjo agrio usando Agrobacterium rhizogenes

Norma Angélica Chávez Vela, Lucía I. Chávez Ortiz, Eugenio Pérez Molphe Balch

• español

  Se regeneraron plantas transgénicas de naranjo agrio (Citrus aurantium L.) a partir de raíces transformadas con Agrobacterium rhizogenes . Para obtener las raíces transformadas se cocultivaron, por 96 h, segmentos internodales de tallo de plántulas germinadas in vitro con A. rhizogenes cepa A4 con el plásmido ESC4 que contiene los genes nptII y gus. La mayor eficiencia se obtuvo al usar una suspensión de 1 × 10 8 células mL−1 y 96 h de cocultivo. En estas condiciones, 91% de los explantes produjeron raíces transformadas, con un promedio de 3.6 raíces por explante. Para la regeneración de brotes se cultivaron segmentos de raíz transformada en medio con 5.0 mg L−1 de benciladenina (BA) y 1.0 mg L−1 de ácido naftalenacético (ANA). En este medio, 18% de los segmentos de raíz transformada produjeron brotes adventicios con un promedio de 1.25 brotes por explante. La actividad de gus fue evidente en las raíces transformadas y los brotes y plantas regeneradas. La presencia de los genes foráneos fue confirmada por análisis PCR y Southern blot. Este sistema se utilizó posteriormente para generar raíces y brotes de naranjo agrio transformados con el gen que codifica para la proteína de la cápside del Virus de la Tristeza de los Cítricos

• English

  Transgenic Sour orange (Citrus aurantium L.) plants were regenerated from Agrobacterium rhizogenes-transformed roots.

  To obtain the transformed roots, internodal stem segments from in vitro germinated seedlings were cocultured for 96 h with Agrobacterium rhizogenes strain A4 with the ESC4 plasmid that contains the nptII and gus genes. The highest efficiency was obtained using a suspension of 1 × 10 8 cells mL−1 and 96 h of coculture. Under these conditions, 91% of the explants produced transformed roots with an average of 3.6 roots per explant. For shoot regeneration, segments of transformed roots were cultured on regeneration medium with 5.0 mg L−1 benzyladenine (BA) and 1.0 mg L−1 napthaleneacetic acid (NAA).

  In this medium, 18% of the transformed root segments produced adventitious shoots, with an average of 1.25 shoots per explant.

  Gus activity was evident in the transformed roots, shoots and regenerated plants. The presence of the foreign genes was confirmed by PCR analysis and Southern blot. Afterwards, this system was used to generate sour orange roots and shoots transformed with the gene that codes for the capsid protein of the Citrus Tristeza Closterovirus