Clonacion, expresión, caracterización bioquímica parcial y modelado de una esterasa de Acinetobacter Calcoaceticus SP DSM587

• Inmaculada Navarro-González ^[1]
  1. [1] Universidad de Murcia

     Universidad de Murcia

     Murcia, España

     
• Localización: Biocyt: Biología, Ciencia y Tecnología, ISSN-e 2007-2082, Vol. 6, Nº. 1, 2013, págs. 410-425
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Cloning, expression, biochemical partial charaterization and modeling of esterase from Acinetobacter Calcoaceticus SP DSM587
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• Resumen
  • español

    El objetivo de este trabajo ha sido clonar, expresar, purificar y caracterizar la EstB de Acinetobacter calcoaceticus codificada por el gen X8895. La esterasa se clonó en el sistema de expresión pET28a+ y fue purificada parcialmente. El peso molecular de la esterasa fue de 36kDa (estimado por SDS-PAGE) y 68.9 kDa (estimado por cromatografía de filtración en gel). La esterasa mostró su máxima actividad a pH 8 y a 35ºC hacia sustratos de cadena corta (PNPA, PNPB y PNPC) y también mostró actividad sobre el S-metiltiobutanoato. Empleando la proteína 1QoR se predijo su estructura y los aminoácidos del centro activo.

  • English

    The aim of this paper has been to clone, express, purify and characterization the EstB from Acinetobacter calcoaceticus encoded by the gen X8895. The esterase was cloned in Pet28a and partially purified. The molecular mass of the purified enzyme was 36 kDa (by SDS) and 68.9 KDa (by gel filtration chromatography). The EstB showed a maximum activity at 35ºC and pH 8 and towards shorter acyl chain lengths (PNPA, PNPB, PNPC) and showed activity about Smethyltiobutanoate, too. The catalytic triad has been predicted by aminoacid sequence alignment and the structure modeling was performed used esterase 1QoR as template.