Resumen de El gen tpi como herramienta en los estudios epidemiológicos de la giardiosis
María Pilar Goñi Cepero, María Benito Fernández, Joanna Cieloszyk, Epifania Arango Isaza, Daniella LaPlante, María Antonia Remacha Esteras, Cristina Seral García, Mª Teresa Fernández Rodrigo, Laura Lafarga Molina, Encarnación Rubio Aranda
- español
Giardia duodenalis es un protozoo que causa infección en humanos y animales, que se puede transmitir por vía hídrica, de persona a persona o por contacto con animales, siendo una de las infecciones intestinales más frecuentes en nuestro país, por lo que supone una preocupación de Salud Pública. Su estudio epidemiológico, requiere la caracterización molecular de los parásitos, utilizando genes con gran variabilidad como el que codifica la triosafosfatoisomerasa (tpi) y analizando la homología entre aislamientos.
El objetivo del trabajo es establecer el criterio de identidad que permita la comparación epidemiológica de los aislamientos de Giardia.
Se recogieron 2-3 muestras de heces en días alternos, de 26 pacientes con giardiosis. Tras la extracción de ADN, se amplificaron por técnicas de PCR, un fragmento del gen tpi y un fragmento del gen de la beta-giardina (bg), que se utilizó como comparación. Los fragmentos obtenidos fueron secuenciados y las secuencias analizadas con los programas BioEdit y DnaSP v.5.0.
Las secuencias del gen tpi mostraron una elevada divergencia, con valores de diversidad Π entre 0 y 0,21219. La aparición de picos múltiples en el cromatograma, indicaron la presencia de varios clones en la misma muestra. Las diferencias entre aislamientos del mismo paciente fueron iguales o mayores que las encontradas para el conjunto de todas las muestras.
La variabilidad del gen tpi no permite establecer unos criterios de identidad, necesarios para la identificación de aislamientos.
Las infecciones mixtas intragenotipo ocurren de una forma muy frecuente, sugiriendo una implicación de la vía ambiental como principal fuente de transmisión o una variación genética muy elevada.
- English
Giardia duodenalis is a protozoon that causes infection in humans and animals. It can be transmitted by contaminated water, from person to person or by contact with animals; it being the cause one of the most common intestinal infections in our country, so it is a public health concern. The epidemiological study thereof requires the molecular characterization of parasites, using genes with great variability, such as the one that codes triosephosphate isomerase (tpi), and analizing the homology between isolates.
The purpose of this work is to establish the identity criterion for epidemiological comparison of Giardia isolates.
2-3 stool samples were collected in alternate days from 26 patients with giardiasis. After DNA extraction, a fragment of the tpi gene and a fragment of the beta-giardin (bg) gene—used for comparison purposes—were amplified by means of PCR techniques. The obtained fragments were sequenced and the sequences analyzed with the BioEdit and DnaSP v.5.0 software.
The tpi gene sequences showed a high divergence, with values of diversity Π ranging from 0 to 0.21219. The appearance of multiple peaks in the chromatogram points to the presence of various clones in the same sample. The differences between isolates from the same patient where equal or higher than those found for the collection of all samples.
The variability of the tpi gene does not allow identity criteria to be established, which are necessary for isolate identification. Mixed intragenotype infections occur very frequently, which suggests the environmental path is the principal path of transmission and/ or there is very high genetic variability.
- português
Giardia duodenalis é um protozoário que causa infeção em humanos e animais, que se pode transmitir por via hídrica, de pessoa a pessoa ou por contacto com animais, sendo uma das infeções intestinais mais frequentes no nosso país, representando uma preocupação de Saúde Pública. O seu estudo epidemiológico requer a caracterização molecular dos parasitas utilizando genes com grande variedade como o que codifica a triose-fosfato isomerase (tpi) e analisando a homologia entre isolamentos.
O objetivo do trabalho é estabelecer o critério de identidade que permita a comparação epidemiológica dos isolamentos de Giardia.
Recolheram-se 2-3 amostras de fezes, em dias alternados, de 26 pacientes com giardíase. Após a extração de ADN, um fragmento do gene tpi e um fragmento do gene de beta-giardina (bg) foram amplificados por técnicas de PCR, que foram utilizadas como comparação. Os fragmentos obtidos foram sequenciados e as sequências analisadas com os programas BioEdit y DnaSP v.5.0.
As sequências do gene tpi mostraram uma elevada divergência, com valores de diversidade Π entre 0 e 0,21219. O aparecimento de múltiplos picos no cromatograma indicaram a presença de vários clones na mesma amostra. As diferenças entres isolamentos do mesmo paciente foram iguais ou maiores que as encontradas para o conjunto de todas as amostras.
A variabilidade do gene tpi não permite estabelecer alguns critérios de identidade necessários para a identificação de isolamentos.
As infeções mistas intragenótipo ocorrem de uma forma muito frequente, sugerindo uma implicação da via ambiental como principal fonte de transmissão e/ou uma variação genética muito elevada.
