Resumen de Gene profiling and expression of major allergen Alt a 1 in Alternaria alternata and related members of the Pleosporaceae family

Fardis Teifoori, Masoomeh Shams-Ghahfarokhi, Mehdi Razzaghi-Abyaneh, Jorge Martínez Quesada

• español

  Antecedentes Los miembros de la familia Pleosporaceae son una fuente importante de alérgenos aéreos causantes de asma y enfermedades alérgicas.

  Objetivos El objetivo de este trabajo fue estudiar el perfil de expresión génica de la proteína Alt a 1 en Alternaria alternata y otros miembros de la familia Pleosporaceae, entre las cuales pueden citarse Stemphylium botryosum, Ulocladium chartarum, Curvularia lunata, Cladosporium cladosporioides y Epicoccum nigrum.

  Métodos Alternaria alternata y otros géneros relacionados se cultivaron en caldo Czapek-Dox a 25°C durante 21 días. La existencia de Alt a 1 en los filtrados de los cultivos se evaluó mediante electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato sódico (SDS-PAGE) para después confirmarla mediante inmunotransferencia. Se realizó RCP en tiempo real para la cuantificación de la transcripción del gen responsable (Alt a 1) utilizando ADNc a partir del ARN del hongo.

  Resultados Mediante SDS-PAGE se visualizaron bandas de proteínas de 14 a 100kDa. La banda de 14kDa, correspondiente a Alt a 1, estaba presente en A. alternata, S. botryosum y U. chartarum. Se detectó expresión génica de Alt a 1 en A. alternata y otros géneros relacionados. El valor medio de Ct registrado en los aislamientos de A. alternata varió entre 24,70 y 27,84; en otros taxones cercanos, el intervalo estuvo entre 23,62 y 32,09. No se detectó transcripción o expresión en C. cladosporioides.

  Conclusiones La presencia del gen Alt a 1 y su expresión en A. alternata y otros taxones próximos indica que la proteína Alt a 1 es uno de los componentes principales del mecanismo secretorio de los miembros de la familia Pleosporaceae y puede desempeñar un papel fundamental en su capacidad alergénica.

• English

  Background Members of the Pleosporaceae family are known as important sources of airborne allergens which are responsible for asthma and allergic diseases.

  Aims The purpose of this study was to investigate the gene profiling and expression pattern of Alt a 1 in Alternaria alternata and other members of the Pleosporaceae family including Stemphylium botryosum, Ulocladium chartarum, Curvularia lunata, Cladosporium cladosporioides, and Epicoccum nigrum.

  Methods Alternaria alternata and related genera were cultured on Czapek–Dox broth medium at 25°C for 21 days. The presence of Alt a 1 was assessed in fungal culture filtrates by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS–PAGE) and then confirmed by immunoblot analysis. Real-time PCR was carried out for quantitation of the Alt a 1 gene encoding corresponding protein at the transcriptional level using cDNA prepared from fungal RNA.

  Results SDS–PAGE showed protein bands ranging from 14 to 100kDa. A 14kDa band corresponding to Alt a 1 was present in A. alternata, S. botryosum and U. chartarum. The gene expression of Alt a 1 was reported in A. alternata and some other related genera. The Ct mean value recorded for A. alternata strains ranged from 24.70 to 27.84 while it was in the range 23.62–32.09 for other related taxa. No apparent transcription or expression was revealed in C. cladosporioides.

  Conclusions The presence and efficient expression of Alt a 1 gene in A. alternata and other related taxa indicate that Alt a 1 protein is a major component of the secretory machinery of Pleosporaceae family members, and it may play a crucial role in its allergenicity.