Metodología para evaluar la capacidad de crecimiento ex vivo de las células mesoteliales obtenidas directamente del efluente peritoneal

• Autores: María Ángeles Castro Notario, C. Díaz Rodríguez, María Auxiliadora Bajo, M. Sánchez Cabezudo, M. J. Fernández, Gloria del Peso Gilsanz, M. Martínez, Rafael Selgas Gutiérrez
• Localización: Nefrología: publicación oficial de la Sociedad Española de Nefrología, ISSN 0211-6995, Vol. 20, Nº. 3, 2000, págs. 277-283
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Ex-vivo growth capacity of human mesothelial cells obtained directly from peritoneal effluent
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    La integridad anatómica y funcional de la célula mesotelial (CM) es funda- mental para la estabilidad de la membrana peritoneal. En la actualidad, no exis- te un método que permita comprobar la función y capacidad regenerativa de las CM de forma individual en los pacientes en diálisis peritoneal (DP). La CM puede ser cultivada a partir de muestras obtenidas de biopsia peritoneal, sin embargo es un procedimiento invasivo que no permite realizarse de manera re- petida. El objetivo de este estudio es explorar la posibilidad de cultivar de forma reiterada las CM obtenidas del efluente peritoneal de los pacientes tratados con DP.

    Cincuenta y dos pacientes estables en DP han sido estudiados. Las CM fueron obtenidas a partir del efluente peritoneal del intercambio nocturno con glucosa al 2,27% y cultivadas en frascos de cultivo de 25 cm 2 . Las células de 42 pa- cientes (80,7%) consiguieron alcanzar la subconfluencia en cultivo. En este esta- dio, el porcentaje de células caracterizadas como mesoteliales, tanto morfológi- camente como por técnicas de inmunohistoquímica, se incrementó hasta el 95,5%.

    Posteriormente, las CM se subcultivaron en placas multipocillo, donde mostraron un crecimiento exponencial hasta el día 16. En nueve pacientes (17%) el núme- ro de CM liberadas al efluente peritoneal fue tan bajo que no consiguieron al- canzar el estado de subconfluencia. Otro paciente aunque liberó un número ade- cuado de CM fue incapaz de alcanzar la subconfluencia.

    En resumen, las CM liberadas al efluente peritoneal son accesibles para su es- tudio mediante cultivo. Con esta técnica se abre la posibilidad del seguimiento longitudinal de la biología de las CM de forma individual en los pacientes en DP.

  • English

    The anatomical and functional integrity of mesothelial cells (MC) is neccesary for peritoneal membrane stability. At present, there is no satisfactory method to assess MC function and regenerative capacity in individual peritoneal dialysis (PD) patients. MC may be cultured from peritoneal biopsy specimens, but peritoneal biopsy is an invasive procedure that cannot be performed serially. The aim of this study is to explore the feasibility of serial culture of MC from the peritoneal effluent of PD patients.

    Fifty-two randomly selected PD patients were studied. MC were obtained from the peritoneal effluent of nocturnal 2.27% glucose exchanges and cultured in T25 tissue culture flasks. Subconfluent MC cultures were obtained in 80.7% of pa- tients. At this stage, the percentage of cells in the tissue cultured flask characte- rized as MC by morphology and immunostaining had increased to 95.5%. MC were then subcultured in multi-well culture plates, where they showed exponen- tial cell growth until day 16. Nine (17%) patients released low numbers of MC into the effluent and MC could not be cultured to subconfluence. One additional patient released and apparently adequate number of MC that repeatedly failed to reach confluence. Patients showed the same behavior in several cultures perfor- med.

    In conclusion, peritoneal MC released into peritoneal effluent are accesible for profound analysis by a culture technique. This technique opens the possibility of serial follow-up of the biology of MC individual PD patients.