Estandarización de la técnica de reacción en cadena de la polimerasa para el diagnóstico de la tripanosomosis animal causada por trypanosoma evansi

• Eglys B. González M. ^[1] ; Bernardo González ^[2] ; Roschman González ^[3] ; Nancy Linares ^[1] ; Alfredo Mijares ^[1] ; Trina Perrone ^[1] ; Marta Mendoza ^[2]
  1. [1] Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas

     Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas

     Venezuela

     
  2. [2] Universidad Nacional Experimental Simón Rodríguez

     Universidad Nacional Experimental Simón Rodríguez

     Venezuela

     
  3. [3] Universidad Central de Venezuela

     Universidad Central de Venezuela

     Venezuela

     

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• Localización: Agronomía Tropical, ISSN 0002-192X, Vol. 56, Nº. 4, 2006
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Standarization of a polimerase chain reaction technique for the diagnosis of animal trypanosomiasis caused by Trypanosoma evansi
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    Existen varios métodos para el diagnóstico de la tripanosomosis equina, Trypanosoma evansi, cuya sensibilidad varía según la etapa de la enfermedad. Recientemente, métodos moleculares como el PCR, basado en la detección de ADN, han mejorado el diagnóstico de las parasitosis. El objetivo de este trabajo fue estandarizar, comparar y evaluar la técnica de PCR para el diagnóstico de T. evansi en un modelo experimental múrido. Para ello, se infectaron ratones con el aislado TEVA1. Luego de 48 (horas) se realizó la evaluación parasitológica por cuantificación de Brener y por la técnica de microhematocrito Woo. Para el diagnóstico molecular se purificó el ADN genómico y se amplificó por PCR, empleando los cebadores específicos para T. evansi, ESAG 6/7, TEV1/2 y TBR1/2. Todos los cebadores evaluados rindieron el producto de amplificación esperado, excepto en los animales sanos. Los cebadores ESAG 6/7 presentaron una sensibilidad de 1ng de ADN proveniente de parásitos purificados, y de 10ng para muestras proveniente de sangre completa. Del total de ratones infectados, 47% (n=8) resultaron positivos por el método de Brener, 70% (n=12) por Woo y todos por PCR (100%). Estos resultados demostraron que la PCR es más eficiente y sensible que los métodos parasitológicos para la detección de T. evansi en modelo múrido, cuando se presentan parasitemias muy bajas.

  • English

    There are several methods to diagnose this illness, equine trypanosomiasis,caused by Trypanosoma evansi and their sensibility varies depending on thedisease stage. Recently, molecular methods, like PCR, based on DNA detectionhave improved the diagnosis of this disease. The purpose of this work was tostandardize, differentiate and evaluate the PCR technique for the diagnosis of T. evansi in an experimental murine model. Mice were infected with TEVA1.After 48 hours they were evaluated using the parasitological methods of Brenersquantification and the Woo haematocrit centrifuge technique. For moleculardiagnosis, genomic DNA was purified and amplified by PCR using primersspecific for T. evansi: ESAG 6/7, TEV1/2 y TBR1/2. All primers rendered theexpected product of amplification, except when non infected animals were used.Primers ESAG 6/7 showed a sensibility of 1ng using DNA from purifiedparasites and of 10ng using DNA from whole blood samples. From the total ofmice infected, 47% (n=8) were positive by Breners method, 70% (n=12) byWoos method, and all (100%) by the PCR technique. This result indicates thatthe PCR technique is much more efficient and sensitive than the parasitologicalmethods used for diagnosing T. evansi in a murine model when there is low concentration of parasites.