Establecimiento de un protocolo rapds eficiente para plantas de ñame

• Maira Oropeza C. ^[1] ; Erick A. Marilyn R. ^[1] ; Teresa Edith Vargas C. ^[1]
  1. [1] Universidad Central de Venezuela

     Universidad Central de Venezuela

     Venezuela

     
• Localización: Agronomía Tropical, ISSN 0002-192X, Vol. 56, Nº. 4, 2006
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Establishment of an efficient rapd protocol for yam plants
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• Resumen
  • español

    Dada la importancia del cultivo de ñame, Dioscorea alata en Venezuela y el resto del mundo, en el Laboratorio de Biotecnología Vegetal de la Universidad Central de Venezuela se logró establecer sistemas de regeneración in vitro para esta especie vía Organogénesis y Micropropagación. Basado en la posibilidad de evaluar la variabilidad genética de estas plantas, en el trabajo se estableció un protocolo de Amplificación al Azar del ADN Polimórfico (RAPDs) para el ADN de plantas de ñame. Esta investigación constó de 4 pasos: 1) Extracción del ADN: se realizó con el protocolo propuesto por Doyle y Doyle (1990), modificado con tratamiento con solución limpiadora: (Etanol 76% en 10 mM (NH4COOH)) y precipitación de oligosacáridos con Acetato de Amonio (NH4COOH) 7,5 M; 2) Evaluación del ADN extraído: se realizó mediante el uso de un espectrofotómetro según el protocolo planteado por Sambrook et al. en 1989; 3) Amplificación vía RAPDs del ADN extraído: según el protocolo planteado por Ramser et al. en 1997; 4) Comprobación de la amplificación del ADN extraído: en gel de agarosa 1,8%. Con las modificaciones aquí señaladas se logró obtener un protocolo adecuado de extracción y amplificación del ADN de D. alata.

  • English

    Because of the importance of yam, Dioscorea alata plants in Venezuela and the world, in the Plant Biotechnology Laboratory at the Universidad Central de Venezuela, in vitro culture systems via organogenesis and micropropagation for this plant species were established. Based on the possibility of evaluating genetic variability in regenerated plants, a protocol of Random Amplification Polymorphic DNA (RAPD) for yam plants was developed. This research was made up of four steps: 1) DNA extraction following Doyle and Doyle (1990) protocol modified with a cleaning treatment with 76% Ethanol in 10 mM NH4COOH and oligosaccharides precipitation with 7,5 M NH4COOH; 2) Spectrophotometric evaluation of extracted DNA according to Sambrook et al. (1989); 3) RAPD amplification of extracted DNA following the protocol established by Ramser et al. (1997) and 4) Verification of the amplification of extracted DNA using 1,8% agarose gel. Good quality D. alata DNA extracts and efficient DNA random amplifications were obtained using the modifications incorporated in our protocol.