Resumen de INTERACCIÓN ENTRE LINFOCITOS T (LT) Y FIBROBLASTOS SINOVIALES (FS) EN ARTRITIS REUMATOIDE (AR): EFECTO DEL METOTREXATO (MTX
La secreción de potentes factores quimiotácticos por los FS favorece el reclutamiento de LT hacia la sinovial reumatoide. A su vez, los LT pueden contribuir a la inflamación crónica mediante la liberación de factores solubles y estableciendo contactos celulares con los FS. Nos propusimos caracterizar las moléculas que intervienen en la interacción LT/FS en la AR así como estudiar el efecto del MTX en esta interacción. Obtuvimos FS de muestras quirúrgicas de pacientes con AR. Aislamos LT por gradiente de ficoll seguido de depleción magnética de células no T, a partir de: a) sangre periférica de controles sanos y de sujetos con AR de inicio no tratados, b) líquido sinovial de pacientes con AR. Establecimos cocultivos de LT y FS en placas de 6 pocillos. Se estudió la expresión de moléculas de adhesión, marcadores de activación y citoquinas mediante citometría de flujo. Los linfocitos T del líquido sinovial (LTLS) de pacientes con AR (n=5) y los LT de sangre periférica (LTSP) de pacientes con AR de inicio no tratados (n=5) indujeron en los FS cocultivados, un aumento de la expresión de ICAM-1, IL-8 e IL-15 intracelulares e IL-15 de superficie. A su vez, los LTLS y LTSP de AR mostraron en cocultivo con FS, un aumento de la expresión de IFN-g, IL-17,CD25 y CD69. Los LTSP de controles sanos (n=5) no modificaron la expresión de citoquinas en FS. La preincubación de los FS con MTX (0.1 uM) redujo significativamente el estímulo de la producción de IL-8 e IL-15 inducida por LT. Asimismo, la preincubación de los LT con MTX (0.1 uM) redujo significativamente la expresión de IFN-g, IL-17, CD25 y CD69 inducida por FS. Un anticuerpo monoclonal bloqueante anti-IL-15 pero no un anticuerpo isotipo control, atenuó el aumento de secreción de IFN-g e IL-17 inducido en LT cocultivados con FS. Un anticuerpo monoclonal bloqueante anti-IL17 atenuó el aumento de expresión de IL-15 e IL-8 inducida en FS por LT. Cuando los cocultivos de LT y FS se realizaron separando las células por medio de insertos con poro de 0.4 uM, no se obsevaron cambios significativos en la producción de citoquinas, moléculas de adhesión ó marcadores de activación. El cocultivo de FS con LT de AR fijados con paraformaldehído sí dio lugar a un aumento de la produción de IL-8 e IL-15, indicando que el contacto celular directo es un factor importante en los efectos observados. En conclusión, la producción de IL-15 e IL-8 por parte de los FS puede contribuir al influjo y proliferación de los LT en la articulación reumatoide. A su vez, citoquinas derivadas de los LT, como el IFNg e IL-17 estimulan la producción de IL-8 e IL-15 en FS creando un asa de retroalimentación positiva que favorece la cronicidad de la inflamación articular. El MTX parece interferir con este mecanismo de retroalimentación, actuando tanto sobre los FS como sobre los LT
