Uso del silicio poroso funcionalizado con acetilcolinesterasa como plataforma de detección de arsénico (III)

• Ruth Fabiola Balderas-Valadez ^[1] ; Vivechana Agarwal ^[1]
  1. [1] Universidad Autónoma del Estado de Morelos

     Universidad Autónoma del Estado de Morelos

     México

     
• Localización: Ingeniería, investigación y tecnología, ISSN 1405-7743, ISSN-e 2594-0732, Vol. 18, Nº. 3, 2017
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Use of porous silicon functionalized with acetylcholinesterase as detection platform for arsenic (III)
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    Sustratos nanoestructurados de silicio poroso funcionalizados con Acetilcolinesterasa (AChE) de dos diferentes diámetros de poros (muestras circulares de 1.2 cm de diámetro), se evaluaron como plataforma de detección de arsénico (III). La inhibición de la actividad enzimática del AChE en presencia de As (III) se usó para generar especificidad en el sensor óptico de As propuesto. Previo al enlazamiento del AChE la superficie de silicio poroso se modificó a través de 3-aminopropil (dietoxi)-metilsilano, seguida de gluteraldehido y la proteína. Cada paso de la funcionalización se caracterizó por espectroscopia de UV-vis-NIR acoplada al accesorio de reflectancia especular para monitorear el incremento del espesor óptico debido a la infiltración de las moléculas. La espectroscopia de FTIR mostró la presencia de enlaces amida I y II debidos al enlazamiento del AChE con el substrato de SiP. Un arreglo enzimático basado en el reactivo de Ellman se empleó para seguir la actividad enzimática de la AChE inmovilizada sobre SiP, así como su inhibición en presencia de As (III). El sistema de detección del progreso de la reacción se basó en el cambio del espesor óptico efectivo de película revelado como el desplazamiento del espectro de reflectancias (método referido como espectroscopia con transformada de Fourier del interferómetro de reflectancia). La respuesta óptica de las muestras de SiP modificadas en presencia de As (III) se comparó con la muestra de control y reveló un límite de detección de 0.77 µM.

  • English

    Acetylcholinesterase (AChE) functionalized nanostructured porous silicon substrates with two different pore diameters (circular samples with 1.2 cm of diameter), have been evaluated as detection platforms for arsenic (III). Inhibition of enzymatic activity of AChE in the presence of As (III) was used to generate specificity in the proposed silicon based optical As sensors. Prior to AChE attachment, oxidized porous silicon surface was modified through 3-aminopropyl (diethoxy) -methylsilane binding followed by glutaraldehyde and the protein. Each functionalization step was characterized by UV-vis-NIR spectrophotometry coupled with the specular reflectance accessory to monitor the increase in optical thickness due to the infiltration of the molecules. FTIR spectroscopy showed the presence of amide I and II bonds due to the covalent binding of acetylcholinesterase with porous silicon substrate. An enzyme assay based on Ellman's reagent was used to test the enzymatic activity of acetylcholinesterase immobilized on porous silicon as well as its inhibition in the presence of As (III). The detection system of the reaction progress was based on the change in the effective optical thickness of the film revealed as a shift in the reflectivity spectra (method referred as reflective interferometric Fourier transform spectroscopy). The optical response of the modified substrates in the presence of As (III) was compared with the control sample and revealed the detection limit of 0.77 µM.