Resumen de Comparación de perfiles multiméricos del factor de von Willebrand obtenidos mediante un ensayo electroforético comercial y electroforesis local con geles de agarosa 1%

Marina Sol López, J. Paiva, A.I. Woods, M.S. Saez, L.H. Barrera, Verónica Privitera, Fernando Andrés Chuliber, Maximiliano Villagra Iturre, Diana Penchasky, P. Sorroche, M.E. Martinuzzo, Analía Sánchez Luceros

• español

  La evaluación de multímeros del factor de von Willebrand (VWF) es parte esencial del diagnóstico de algunas variantes de la enfermedad de von Wi-llebrand (VWD). Mediante técnicas electroforéticas adecuadas se pueden estimar los multímeros de peso molecular bajo (LMWM), intermedio (IMWM), alto (HMWM) y ultra-alto (UHMWM).El objetivo del presente trabajo es determinar si el perfil multimérico obtenido mediante electroforesis en gel de agarosa seguido de inmunofijación en sistema semiautomático (Hydragel 5) y el obtenido mediante el método de referencia son comparables. Se analizaron 24 muestras: 4 de pacientes con síndrome de von Willebrand adquirido (AVWS) secundarios a síndrome mieloproliferativo con trombocitosis (MPS-T), 18 de pacientes con VWD de diferente tipo y 2 de pacientes con púrpura trombocitopénica trombótica (PTT).Se realizó la medición con dos metodologías diferentes:• Multímeros por método semiautomático: electro-foresis SDS-agarosa seguida de inmunofijación usando Hydragel 5 von WillebrandMultimers kit en el instrumento Hydrasys 2 (Sebia), analizado mediante programa Phoresis. Multímeros por método de referencia: electroforesis SDS agarosa seguida de inmunofijación usan-do anticuerpos policlonales: anti-VWF humana desarrollado en conejo, anti IgG de conejo desa-rrollado en cerdo/biotinilado, avidina peroxidasa y reveladas con 4Cl-1-Naftol. Perfil multimérico: analizado mediante ImageQuant TL 8.1 (GE Healthcare).Las muestras de pacientes con AVWS mostraron una disminución de HMWM. Aquéllas con VWD tipo 1 mostraron un perfil multimérico normal. Se detectaron UHMWM en las muestras de pacientes con PTT.Con respecto a las muestras de pacientes con VWD tipo 2, 2A, 2B y 2M, se obtuvo buena concordancia entre ambos métodos.El método semiautomático parece ser útil y apropia-do como tamizaje de perfiles multiméricos de VWF en laboratorios clínicos de Hemostasia, analizados por profesionales con alta experiencia en el diagnóstico de VWD.

• English

  The evaluation of the von Willebrand factor (VWF) multimers is an essential part of the diagnosis of some variants of the von Willebrand disease (VWD). Using appropriate electrophoretic techniques, low (LMWM), intermediate (IMWM), high (HMWM) and ultra-high (UHMWM) molecular weight mul-timers can be estimated.The aim of the study was to determine whether the multimeric profile obtained by agarose gel electrophoresis followed by immunofixation in a semiautomated system (Hydragel 5) and by the reference method are comparable.24 samples were analyzed: four from patients with acquired von Willebrand syndrome (AVWS) secondary to myeloproliferative syndrome with thrombocytosis (MPS-T), 18 from patients with VWD of different types, and 2 from patients with thrombotic thrombocytopenic purpura (TTP).The measurement was performed with two different methodologies:• Multimers by semiautomatic method: SDS-Agarose electrophoresis followed by immunofixation using Hydragel 5 von Willebrand Multimers kit on the Hydrasys 2 instrument (Sebia), analyzed by the Phoresis program.• Multimers by reference method: SDS-agarose electrophoresis followed by immunofixation using polyclonal antibodies: rabbit anti-human VWF, piggrown/biotinylated rabbit IgG, avidin perox-idase and revealed with 4Cl-1-naphthol. Multim-eric profile: analyzed by ImageQuant TL 8.1 (GE Healthcare).AVWS samples showed decreased HMWM, while type 1 VWD samples showed a normal multimeric profile. UHMWM were detected in the TTP samples.Considering the VWD type 2 samples, 2A, 2B and 2M, a good agreement was obtained between both methods.The semiautomated method seems to be useful and appropriate for screening VWF multimeric profiles in hemostasis clinical laboratories analyzed by high-ly specialized staff in the diagnosis of VWD.