Resumen de Determinación de la mutación FLT3-ITD por dos métodos en pacientes con leucemia mieloide aguda:: comparación e implementación de un nuevo método

D. Sánchez, P. Gargallo, V. Romano, V. Montero, R. Cabrerizo

• español

  La activación constitutiva en ausencia de ligando del receptorFLT3 (FMS-like tyrosine kinasa 3) se presenta con alta frecuencia en leucemia mieloide aguda (LMA) debido a dos tipos de mutaciones en su gen: duplicaciones internas en tándem (ITD) que afectan la región yuxtamembrana, o mutaciones puntuales que afectan el dominio tirosina quinasa (TKD). La primera se asocia con pronóstico desfavorable, mientras que para la segunda los resultados no son concluyentes. En este trabajo se comparan dos métodos para la detección de FLT3-ITD: reacción en cadena de la polimerasa seguida de electroforesis en gel de agarosa (PCR+EGA) y reacción en cadena de la polimerasa seguida de análisis de fragmentos (PCR+AF), se evalúa la información adicional brindada por esta última metodología y se correlaciona el estado mutacional del gen FLT3 con múltiples variables. Se estudiaron 63 pacientes con LMA para la bús-queda de la mutación FLT3-ITD por ambos métodos. Hubo buena concordancia entre las técnicas (k=0,85). Se detectaron dos falsos negativos por PCR+EGA, así como un resultado indeterminado. En base al ensayo cuantitativo, PCR+AF, las relaciones alélicas encontradas fueron de 0,05 a 7,7 (mediana 0,81) y los tamaños ITD variaron entre 16 a 174 (mediana 34) pb. La frecuencia de aparición de la mutación fue de 20,6%, con predominio en pacientes con subtipo FAB M2. No se hallaron diferencias significativas en el recuento de leucocitos, neutrófilos, plaquetas, hemoglobina y blastos en sangre periférica entre pacientes portadores y no portadores de la mutación. La sobrevida global de los pacientes FLT3-ITD+ fue significativamente menor, con un riesgo relativo de muerte a los 6 meses de 1.45.Por la relevante información extra que brinda el en-sayo PCR+AF respecto de la PCR+EGA, la sencillez y el tiempo acotado de su procedimiento, resulta una técnica sólida para definir pronóstico de la enfermedad y redefinir riesgo, y factible de implementar en el laboratorio clínico

• English

  Constitutive activation in the absence of FLT3 re-ceptor ligand (FMS-like tyrosine kinase 3) occurs with high frequency in acute myeloid leukemia (AML) due to two types of mutations in its gene: internal tandem duplications (ITD) that affect the juxtamembrane region, or point mutations that affect the tyrosine kinase domain (TKD). The first one is associated with an unfavorable prognosis, whereas the second type gives inconclusive results.In this work, two methods are compared for the detection of FLT3-ITD: polymerase chain reaction followed by agarose gel electrophoresis (PCR+AGE) and polymerase chain reaction followed by fragment analysis (PCR+FA), the additional information provided by the latter methodology is evaluated and the mutational state of the FLT3 gene is correlated with multiple variables.We studied 63 patients with AML in search of the FLT3-ITD mutation by both methods. There was good agreement between the techniques (k = 0.85). Two false negatives were detected by PCR+AGE, as well as an indeterminate result. Based on the quantitative assay, PCR+FA, the allelic ratios found were from 0.05 to 7.7 (median 0.81) and ITD length ranged from 16 to 174 (median 34). The frequency of appearance of the mutation was 20.6%, with predominance in patients with subtype FAB M2. No significant differences were found in the count of leukocytes, neutrophils, platelets, hemoglobin and blasts in peripheral blood between carriers and non-carriers of the mutation. The overall survival of the FLT3-ITD+ patients was significantly lower, with a relative risk of death at 6 months of 1.45.The relevant extra information provided by the PCR+FA compared with PCR+AGE, the simplicity and limited time of its procedure show it as a strong technique for forecasting the disease and redefining risk, and feasible to implement in the clinical labo-ratory