Amplificación isotérmica mediada por LOOP (LAMP) de ácidos nuclecios en el diagnostico clínico

• EDWIN SÁNCHEZ ^[1] ; MARITZA NINA ; PAMELA AGUIRRE ; MAYRA ARCE ; NEYDA TORO ; RODRIGO VILELA
  1. [1] FCFB-UMSA Estudiantes de 4to año de la Carrera de Bioquímica
• Localización: Con-ciencia: Revista de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas, ISSN-e 2710-3609, ISSN 2310-0265, Vol. 2, Nº. 1, 2014, págs. 127-140
• Idioma: español
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    A medida que va desarrollando la tecnología, los microorganismos también van aumentando su capacidad de virulencia haciéndose más resistentes a los antibióticos de última generación; pruebas de rutina como la Reacción en Cadena de la Po-limerasa (PCR) son herramientas que nos ayudan en el diagnóstico clínico, pero una de las principales desventajas es su alto costo debido al equipamiento que usa y su la larga duración en que esta puede entregar resultados. Para ello es recomendable usar métodos rápidos, sensibles y específicos que nos ayuden en el diagnóstico de enfermedades infecciosas. Un novedoso método que actualmente se usa en países desarrollados es la Amplificación Isotérmica Mediada por Loop (LAMP) de Ácidos Nucleicos. LAMP brinda resultados en menor tiempo con alta sensibilidad y especificidad, necesitando así de un baño maria que funciona a una sola temperatura entre 60°C a 65°C, 4 cebadores como mínimo y 6 como máximo todos ellos altamente especializados, la DNA polimerasa es la Bst po-limerasa la cual tiene actividad desplazante de cadena que proviene de Bacillus stearo-thermofilus; en caso de amplificar RNA se hace uso de una transcriptasa reversa; los resultados pueden ser vistos a simple vista debido a la turbidez que forma después de la reacción, también se pueden usar reactivos como la calceina (método visual por fluorescencia), CYBR green, que dan cierta coloración cuando la reacción se torna positiva. Los países que están en vías de desarrollo son los que más sufren de infecciones por microorganismos, una de las causas se da por la pobreza y mala alimentación siendo así LAMP una buena opción para incorporar como pruebas de rutina en el laboratorio debido a su bajo costo y a su simplicidad en cuanto a equipos

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    As technology develops, the microor-ganisms are also increasing their ability to become more virulent antibiotic resistant generation; routine tests Polymerase Chain Reaction (PCR) are tools that help us in the clinical diagnosis buta major disadvantage is its high cost due to equipment using the length and where it can deliver results. It is therefore advisable to use rapid, sensitive and specific methods to help us in the diagnosis of infectious diseases. A novel method currently used in developed countries is Mediated Isothermal Amplification Loop (LAMP) Nucleic Acids. LAMP provides results in less time with high sensitivity and specificity, thus necessitating a water bath operating at a single temperature of 60°C to 65°C, 4 and 6 primers at least maximum all highly specialized, DNA polymerase is the Bst polymerase activity which is displacing string comes from Bacillus stearothermofilus; in case of amplifying RNA us-ing a reverse transcriptase is made; the results can be seen with the naked eye due to haze that forms after the reaction, can also be used as reagents calcein (fluorescence visual method), CYBR green, giving a coloration when the reaction becomes positive . Countries that are developing are the worst sufferers of microorganism infections, one of the reasons given by poverty and poor diet and LAMP still a good option to incorporate as routine tests in the laboratory due to it's low cost and simplicity in terms of equipment