Resumen de Efecto del método de capacitación espermática bovina sobre la concentración y tasa de fertilización in vitro
Raúl H. De León García, Roderick A. González M., Pedro Guerra M., Kristel Flores
- español
Los espermatozoides mamíferos no son capaces de fertilizar el ovocito inmediatamente; primero deben sufrir un periodo de preparación llamado capacitación espermática, que se define como el conjunto de modificaciones que ocurren después de la maduración en el epidídimo, y que le confieren la capacidad de fertilizar al ovocito. Un primer requisito en el proceso de preparación de los espermatozoides para la fertilización in vitro (FIV) bovina incluye la separación de los mismos del diluyente y/o del crioprotector. Con el objetivo de examinar el efecto que tiene el método de capacitación sobre la concentración y la tasa de fertilización se realizó este trabajo en el Laboratorio de Biotecnología del IDIAP. Para ello se utilizaron ovocitos provenientes de ovarios post mortem que fueron transportados al laboratorio donde se puncionaron los folículos antrales (entre 2 mm y 5 mm). Posteriormente, se seleccionaron ovocitos con más de cinco capas de células del cúmulo y se colocaron a madurar por 20 horas. Transcurrido este tiempo se procedió a la FIV. Para la separación de la fracción espermática motil se utilizaron los métodos Gradiente de Percoll® y Swim up. La concentración espermática se midió utilizando un SpermaCue® y la tasa de fertilización se evalúo a las 18 horas post fertilización utilizando microscopio con aumento de 100x. Los resultados indicaron que la mayor concentración espermática y tasa de fertilización se observaron con Swim up (4,8 x 106 y 83,7 ± 7,8 %, respectivamente), mientras que con el Gradiente de Percoll se lograron valores de 3,5 x106 y 60,22 ± 6,3% para concentración espermática y tasa de fertilización. La producción total de embriones con ambos métodos fue de 95 embriones transferibles, con una tasa de desarrollo de 21,7%. En este estudio se observó que la motilidad espermática no influyo en la tasa de fertilización y se concluye que ambos métodos de capacitación espermática son aptos para la producción de embriones in vitro.
- English
Mammalian sperm are not able to fertilize the oocyte immediately; they must first undergo a preparation period called sperm capacitation, which is defined as the set of modifications occurring after sperm maturation in the epididymis, giving it the ability to fertilize the oocyte. A first requirement in the process of preparing bovine sperm for in vitro fertilization (IVF) includes the separation of the sperm from the diluent and/or cryoprotectant. This work was carried out at the Biotechnology Laboratory of IDIAP in order to examine the effect of sperm capacitation method on concentration and fertilization rate of in vitro fertilization. For this purpose, oocytes from post-mortem ovaries were colected and transported to the laboratory where the antral follicles (between 2 mm and 5 mm) were punctured. Subsequently, oocytes with more than 5 layers of cumulus cells were selected and matured for 20 hours. After this time, IVF was carried out. The Gradient methods of Percoll® and Swim up were used for the separation of the motil sperm fraction. Sperm concentration was measured using a SpermaCue® and the fertilization rate was evaluated at 18 hours post-fertilization using a microscope with an increase of 100x. The results indicated that the highest sperm concentration and fertilization rate were observed with Swim up (4,8 x 106 and 83,7 x 7,8 % respectively), while the values with the Percoll Gradient were 3,5 x106 and 60,22 x 6,3% for sperm concentration and fertilization rate. The total production of embryos with both methods was 95 transferable embryos, with a development rate of 21,7%. This study reported that sperm motility did not influence the fertilization rate and concludes that both sperm capacitation methods are suitable for in vitro embryo production.
