Resumen de Obtaiment of Pudu (Pudu pudu) deer Embryos by the Somatic Nuclear Transfer Technique

Felipe Venegas, Michel Guillomot, Xavier Vignon, Jean-Luc Servely, Chistophe Audouard, Enrique Montiel Eulefi, Daniel Le Bourhis, Sandrine Perón, Pilar Soto, Mariana Rojas

• español

  Los objetivos de este trabajo fueron los de producir embriones de pudú, obtenidos por la transferencia de núcleos de fibroblastos de la oreja de pudú en ovocitos de un rumiante domésticos que es el bovino. Para posteriormente en un trabajo futuro proceder a la transferencia de embriones de pudú, al útero de hembras receptoras sincronizadas de otra especie. Se obtuvieron biopsias de 1 mm aproximadamente del borde externo de la orejas de dos ciervos pudu machos del jardín zoológico Buin-Zoo, Santiago de Chile. Las líneas celulares han sido establecidas y conservadas según los protocolos utilizados para las bovinos. Los ovocitos son obtenidos por punción del complejo cúmulos-ovocito (COC).desde ovarios de vacas recuperados del matadero. Cada ovocito es enucleado y fusionado con un fibroblasto aislado insertado bajo la zona pelúcida. La fusión de membranas celulares es obtenida por choques eléctricos. En cuanto a la cronología, observamos que al segundo día se forma una etapa de dos blastómeras, al tercer día mórulas de 8 a 16 células, y desde el cuarto día se ha diferenciado como blastocisto, el cuál al séptimo día termina por eclosionar de la zona pelúcida La obtención de blastocistos embrionarios indica que es posible obtener embriones de pudú mediante clonaje heteroespecífico, aunque, el porcentaje de éxito obtenido es relativamente bajo. Queda aun por verificar la viabilidad de los embriones así obtenidos después de la transferencia in útero

• English

  The objective of this project is to produce pudu embryos, obtained by means of fibroblast transfer taken from the ear of one animal, to the oocytes of a domestic ruminant such as cattle. In further work, the pudu embryos will be transferred to the uterus of synchronized recipient females of another species. Biopsies 1mm in size were obtained from the outer rim of the ear of two male pudu deer belonging to the Buin Zoological park, Santiago, Chile. The cell lines have been established and kept according to protocols used in cattle. The oocytes are obtained through a puncture in the oocyte-cumulus complex (OCC) from cow ovaries recovered from the butcher. Each oocyte is enucleated and fused with an isolated fibroblast which is inserted beneath the pellucid zone. The fusion of cell membranes is achieved by means of electric shocks. In respect to the timetable, we have observed that a stage of two blastomers is reached on the second day, and morulae of 8 to 16 cells on the third day. On the fourth day it has differenciated as a blastocyst and on the seventh day it finally hacht from the pellucid zone. The obtainment of embryonic blastocytes indicates that it is possible to obtain pudu embryos through heterospecific cloning, even though the percentage of success is relatively low. The viability of the embryos obtained in this manner after in uterus transfer remains still to be verified