Resumen de Caracterización, aislamiento y cultivo de células germinales primordiales de conejo

Mariana Rojas, Xavier Vignon, María Angélica Montenegro, Mariano del Sol, Eduardo Bustos Obregon, Jaques Fléchon

• español

  Las células germinales primordiales (CGP) obtenidas directamente del embrión, no son capaces de generar líneas celulares pluripotentes, pero ellas adquieren esta capacidad si son mantenidas en cultivos "in vitro". Los objetivos de este estudio fueron: 1) Caracterizar inmunohistoquímicamente las CGP de conejo en sus distintas etapas embrionarias "in vivo". 2) Reconocer el lugar óptimo para obtener estas células según edad embrionaria. 3) Evaluar si las células nutricias murinas permiten la proliferación y sobrevivencia de las CGP en cultivo in "vitro" . Se obtuvieron embriones de 16 conejas de raza Neozelandesa blanca, de 7, 9, 10, 14 y 16 días post coito (dpc). Un grupo de cada camada fue procesado "in toto" y en cortes por congelación con fosfatasa alcalina y dos anticuerpos monoclonales: TEC-1 (reconoce antígeno SSEA-1 de superficie de las CGP) y PG-2 (marca el citoplasma perimitocondrial de CGP). Otro grupo de embriones fue cultivado durante 22 días usando células nutricias STO y MI-220. En embriones de 7 días, el epiblasto del disco embrionario presenta células TEC-1 positivas y PG-2 negativas. Esta marca se mantiene así durante la estadía transitoria en el alantoides y durante la migración a través del meso intestinal. Cuando las CGP colonizan la gónada se transforman en TEC-1 negativas y PG-2 positivas. La capacidad de proliferación "in vitro" de las células germinales primordiales de conejo, resultó ser mucho menor que la observada en ratón. Esto guarda relación con la reducida capacidad de proliferación de estas células "in vivo". La eficiencia proliferativa de las CGP "in vitro" se correlaciona con la edad del embrión del cual ellos derivan. Por otra parte la morfología de las células "in vitro" guarda también una estrecha relación con la edad del embrión de la cual ellas son aisladas. La edad óptima en la que se obtuvieron mejores proliferación y sobrevivencia en sucesivos pasajes, fue a los 14 días (grupo III). Es decir, en el período en que ellas están proliferando y migrando a través del meso intestinal. Los medios de cultivo de origen murino STO, MI-220 permiten la proliferación y sobrevivencia de las CGP

• English

  Primordial germ cells (PGC) directly obtained from the embryo are not able to start pluripotent cell lines but they do so if cultured in vitro. The aims of this work are. 1) characterize by immunohistochemistry the rabbit PGC in their different "in vivo" embryonary stages; 2) identify the optimal site to obtain these cells according to embryonic age and 3) to evaluate if murine feeder cells permit proliferation and survival of PGC cultured "in vitro". Embryos were obtained from 16 White New Zealand rabbits of 7, 9, 10-14 and 16 days post coitum (dpc). A group of each litter was processed "in toto"and in frozen sections for stainning for alkaline phosphatase and two monoclonal antibodies, TEC-1 (identifies the PGC surface antigen SSEA-1), PG-2 that stains PGC perimitochondrial cytoplasm. Another group of embryos of each litter were cultured "in vitro" for 22 days using STO and MI-220 as feeder cells. In 7 days embryos, the epiblast of the embryonic disk present TEC-1 possitive and PG-2 negative cells. This mark is retained during the transitory stage in the alantoid and migration along the intestinal mesentery. When PGC colonize the gonad they become TEC-1 negative and PG-2 positive. "In vitro" proliferative ability of rabbit PGC is less than that observed in mice. The former cells have a reduced proliferation also "in vivo". The "in vitro" proliferative efficiency of PGC correlates well with the age of the embryo from which they derive and so does also their morphology. In conclusion, the optimal age for best proliferation and survival "in vitro" was at 14 days, that is the period when PGC are proliferating and migrating along the intestinal mesentery "in vivo". The murine culture medium with STO and MI-220 allow proliferation and survival of rabbit PGC.