Inmunodiagnóstico de fasciolosis humana y ovina empleando una fracción de 24-29 kDa de Fasciola hepatica obtenida mediante inmunoadsorción

• MARCOS SILVA ^[2] ; TEXIA GORMAN ^[1] ; HÉCTOR ALCAÍNO ^[1]
  1. [1] Universidad de Chile

     Universidad de Chile

     Santiago, Chile

     
  2. [2] Universidad Nacional Andrés Bello Escuela de Tecnología Médica y Departamento de Ciencias Biológicas
• Localización: Parasitología latinoamericana, ISSN-e 0717-7712, ISSN 0717-7704, Vol. 60, Nº. 1-4, 2005, págs. 38-42
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Immunodiagnosis of human and sheep fasciolosis with a 24-29 kda fraction of fasciola hepatica obtained by immunoadsortion
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  • español

    Los componentes proteicos de los productos de excreción-secreción (E-S) de F. hepatica adultas fueron fraccionados por cromatografía de filtración en gel (Sephacryl S-300), seguido de SDS-PAGE para identificar el eluido conteniendo la fracción de 24 - 29 kDa, de alta sensibilidad y especificidad en el inmuno-diagnóstico de fasciolosis. Con este material se preparó un suero hiperinmune en conejos que luego fue acoplado a una matriz de sefarosa para generar una columna de cromatografía de afinidad que permitió la adsorción directa de estos polipéptidos. Las proteínas así adsorbidas por afinidad, se evaluaron como antígenos en 12 sueros humanos y 20 sueros de ovinos con fasciolosis (10 en fase prepatente y 10 en fase patente de la infección) y en 31 sueros humanos y 20 sueros ovinos negativos a F. hepatica, como sueros controles, mediante Western blot. La fracción antigénica inmunoadsorbida exhibió una sensibilidad de 91,3% y una especificidad de 100% en los sueros humanos y en el caso de los ovinos en fase patente y prepatente de la infección, la sensibilidad obtenida fue de 93,3 % y 80%, respectivamente, siendo su especificidad de 100%. Por lo tanto, se puede concluir que la purificación de la fracción polipeptídica de 24-29 kDa de extractos E-S de F. hepatica mediante inmunoadsorción es un procedimiento eficaz para obtener antígenos para el imunodiagnóstico de fasciolosis humana y animal

  • English

    In order to identify specific and sensitive polypeptides for human and sheep immunodiagnosis of fasciolosis, the protein components of E-S products of adult F.hepatica were separated by gel filtration chromatography (Sephacryl S-300) followed by SDS-PAGE to identify a 24 - 29 kDa fraction. With this fraction a rabbit immune antiserum was prepared and then coupled to a sepharose column matrix to develop an affinity chromatography which permitted the direct immunoadsortion of these polypeptides from crude E-S extracts. The affinity adsorved proteins were then assessed as antigen, using serum samples from 12 human patients and 20 sheep with fasciolosis as well as serum samples from 31 human patients and 20 non infected sheep, as controls, by Western blot analysis. The adsorved antigenic fraction in positive human samples exhibited a sensitivity value of 91.6 % and a specificity value of 100%. The sensitivity values were 93.3% and 80% for chronic and prepatent sheep infection, respectively. On the other hand, none of the control human or sheep negative sera reacted against this fraction, demonstrating 100% specificity values. Therefore, it may be concluded that immunoadsortion of F. hepatica 24-29 kDa fractions from crude E-S extracts is an efficient procedure of obtaining antigens for accurate serodiagnosis of F. hepatica infection in human and animal species