Resumen de Inmunodiagnostico de fasciolosis bovina mediante elisa y western blot

Texia Gorman, Roxana Sanchez, Fernando Fredes, Hector Alcaino

• español

  Se evaluó y caracterizó la respuesta inmune humoral de bovinos naturalmente infectados con Fasciola hepatica frente a un extracto total de antígenos de excreción-secreción (E-S) y a una fracción antigénica semipurificada cromatográficamente (<30 kDa), seleccionada previamente por su eficiencia diagnóstica en otras especies. Ambos preparados antigénicos fueron analizados mediante ELISA en microplaca y electroforesis en geles de poliacrilamida en condición de denaturación (SDS-PAGE) y posterior inmuno-electrotransferencia enzimática o Western blot. Para ello se emplearon 52 sueros de bovinos con fasciolosis comprobada mediante examen post mortem, 18 sueros de animales sin la infección y 48 sueros de vacunos infectados con hidatidosis, perosin fasciolosis. La sensibilidad y especificidad obtenidas en el ELISA con el extracto crudo E-S fueron de 53% y 100%, respectivamente, en tanto que con la fracción semipurificada a igual especificidad (100%) se presentó una sensibilidad mayor ( 90%). A través de Western blot, empleando el extracto antigénico total E-S hubo un reconocimiento específico de bandas correspondientes a los 14, 22, 27-29 y 37-38 kDa. Las bandas de 37-38 y 27-29 kDa destacaron por su sensibilidad y frecuencia, identificadas por el 90% y 100% de los infectados, respectivamente. Con el antígeno semipurificado, se evidenció una banda polipeptídica de 28-30 kDa, reconocida por todos los sueros con fasciolosis. Los resultados demuestran, por un lado, la existencia de diversas fracciones polipeptídicas que potencialmente pueden ser promisorias en el inmunodiagnóstico de fasciolosis bovina

• English

  Immunodiagnosis of bovine fasciolosis was evaluated in terms of its sensitivity and specificity by ELISA and Western blot using a crude excretory-secretory preparation (C E-S) and an E-S partially purified chromatographic fraction of Fasciola hepatica (<30 kDa) as antigens. Serum samples from 52 bovines with natural fasciolosis, 18 without the infection and 48 bovines with hydatid cysts, all checked by post mortem examination, were tested as well. The sensitivity and specificity obtained by ELISA using the C E-S antigens were 53% and 100%, respectively. Likewise, when using the partially purified fraction, the sensitivity of ELISA test increased to 90% with a 100% specificity. The C E-S antigens reacted specifically with sera from infected bovines exhibiting bands of 14, 22, 27-39 and 37-38 kDa in Western blots. When the partially purified fraction was tested, the 28-30 kDa band was consistently detected by sera from all infected bovines and was absent in sera from uninfected as well as in sera from those with hydatid infection. These results indicate that F. hepatica presents different antigens, among which the 28-30 kDa fraction represents polypeptides with diagnostic potential that can be further purified and applied in the immunodiagnosis of bovine fasciolosis corroborating previous results recorded in other animal species