Resumen de Purificación y algunas propiedades de una hialuronidasa del veneno de la serpiente Bothrops brazili "jergón shushupe"

Julio Delgadillo, Mercedes Palomino, Fanny Lazo, Edith Rodriguez, Édgar González, Ruperto Severino, Armando Yarlequé

• español

  En el veneno de la serpiente Bothrops brazili se ha encontrado una proteína con actividad hialuronidasa. La purificación se realizó en dos pasos cromatográficos utilizando columnas de Sephadex G-75 y DEAE Sephadex A-50 equilibradas con buffer acetato de amonio 0,1 M, pH 5. Se obtuvo una purificación de 33 veces con un rendimiento de 54,5 % y una recuperación de proteína activa equivalente a 1,66 %. Esta enzima es una proteína básica con un peso molecular de 110 kDa y un pH óptimo de 5,5. La actividad enzimática a 20 °C se mantuvo en un 50% después de 72 horas y fue completamente inactivada a las 192 horas. Asimismo, la actividad enzimática se incrementó un 38,9 % por la adición de iones magnesio (150 mM). La capacidad difusora de esta proteína se demostró mediante el incremento de la actividad hemorrágica causada en ratones al adicionarse la enzima purificada. Los ensayos de toxicidad en ratones y las pruebas enzima -antivenenos, indicaron que la hialuronidasa carece de toxicidad y es inhibida totalmente por los antivenenos botrópico y lachésico (INS-Perú).

• English

  In the venom of the snake Bothrops brazili was found a protein with hyaluronidase activity. The purification was performed by two chromatographic steps using SephadexG-75 and DEAE SephadexA-50 columns equilibrated with ammonium acetate buffer 0.1M, pH 5. The purification obtained was 33 fold with 54.5% of yield and a recovery of active protein was equivalent to 1.66%. This enzyme was a basic protein with a molecular weight of 110kDa and an optimum pH of 5,5. The enzymatic activity at 20 °C was maintained at 50% after 72 hours and was completely inactivated at 192 hours. Furthermore, the enzymatic activity was increased by 38.9% by the addition of magnesium ions (150mM). The diffusing capacity of the protein was demonstrated by increased hemorrhagic activity caused in mice when added to the purified enzyme. Toxicity assays in mice and enzyme- antivenoms assays indicated that hyaluronidase was not toxic and was completely inhibited by both polyvalent bothropic as monovalent lachesic antivenoms (INS-Perú).