Resumen de Aislamiento y caracterización bioquímica de la bilinearina, un factor activador de protrombina del veneno de la serpiente peruana Bothrops bilineatus (loro machaco)

Edith Rodriguez, Gustavo A. Sandoval, Armando Yarlequé

• español

  A partir del veneno de Bothrops bilineatus (loro machaco) se ha detectado y purificado un activador de protrombina al cual se le ha designado con el nombre de bilinearina. Su aislamiento se consiguió en dos pasos cromatográficos en columnas de CM Sephadex C-50 y Sephadex G-100 SF, equilibradas con buffer acetato de amonio 0,05 M pH 7,0, purificándola 10,4 veces con un rendimiento de 78,3%, obteniéndose un 7,5% de proteína activa. Asimismo, se determinó que esta enzima es una glicoproteína básica constituida por 2 cadenas polipeptídicas con un peso molecular de 23 kDa, conteniendo 8,4% de carbohidratos asociados. La enzima procoagulante es capaz de atacar directamente la protrombina comercial sin la adición de Ca2+, ni fosfolípidos, produciendo trombina activa con capacidad de coagular el plasma humano citratado. Además, la fuerte inhibición registrada con los agentes quelantes EDTA y EGTA, reveló que la bilinearina es una metaloproteasa, con una marcada reducción en su actividad enzimática empleando 2-mercaptoetanol. Esta enzima es estable sólo hasta 45 ºC, perdiendo 60% de su actividad luego de su exposición a 55 ºC. Finalmente, los ensayos de inmunodifusión e inmunoelectroforesis demostraron que bilinearina es una proteína inmunogénica que produce reacción con el antiveneno botrópico polivalente (INS-Perú).

• English

  A prothrombin activator, called bilinearin, has been detected and isolated from Bothrops bilineatus (loro machaco) snake venom. For its isolation, a combination of two chromatographical steps, CM Sephadex C-50 followed by Sephadex G-100 SF in ammonium acetate buffer 05 M pH 7,0. This enzyme was purified 10,4 times with a yield of 78,3%, and a recovery of 7,5%. Furthermore, it was determined that its molecular weight is 23-kDa, and is formed by 2 polypeptide chains, and 8,4% of attached carbohydrates. Bilinearin is a procoagulant enzyme capable of attacking commercial prothrombin in a direct manner without addition of Ca2+ or phospholipids, producing an active thrombin with clotting activity on human plasma. It was also determined that bilinearin is a metalloprotease because of its strong inhibition by EDTA and EGTA. This enzyme was also inhibited by 2-mercaptoetanol and after exposition to 55ºC, although it was only active until 45ºC. Finally, bilinearin is an immunogenic protein as demonstrated by its reaction to polyvalent bothropic antivenom (INS-Peru) using immunodiffusion and immunoelectrophoresis.