Leucocitos polimorfo-nucleares neutrófilos (PMN) y monocitos (MN) humanos fueron expuestos a la alfa hemolisina (AH) de Escherichia coli, y los cambios en calcio citoplásmico se evaluaron mediante espectrofluorometría, usando como indicador el fluorocromo fura 2, previamente incorporado a las células. La AH causó un aumento en el calcio citoplásmico, que fue proporcional a la dosis hemolítica, y que también se observó en células expuestas a los ionóforos de calcio ionomicina y 4 Br A23187. La quelación de calcio extracelular previno los incrementos en calcio citoplásmico inducidos por 2 HU50/ ml de AH; sin embargo, bajo estas condiciones, PMN expuestos a 5 µM de ionomicina mostraron una alza pequeña en fluorescencia, sugiriendo movilización de calcio citoplásmico; ello indica que la mayor parte del incremento en el calcio citoplásmico en respuesta a ionóforos y AH se debió al ingreso de calcio externo al citoplasma. La AH, así como el ionóforo de calcio A23187 y el péptido quimiotáctico FMLP, causaron liberación de mieloperoxidasa (MPO) al medio externo de PMN, lo que evidencia que el incremento en el calcio citoplásmico causó degranulación de éstas células.
Escherichia coli alpha hemolysin (AH) and the calcium ionophores ionomycin and 4 Br A23187 caused increases in cell fluorescence, indicative of elevations in cytoplasmic calcium, in fura 2- loaded human polymorphonuclear leukocytes (PMN) and monocytes (MN). The increase in fluorescence caused by AH was dose dependent. Quelation of extracellular calcium with EGTA prevented fluorescence increases in PMN exposed to 2 HU50/ml AH, but did not prevent a small increase in 4 µM, ionomycin-treated PMN, indicating that ionomycin treatment under conditions of calcium quelation can mobilize calcium from internal stores, and that entry of external calcium accounts for most of the increases in cell fluorescence in cells treated with both AH and calcium ionophores. AH, as well as calcium ionophores and the chemotactic peptide FMLP caused release of myeloperoxidase (MPO) from PMN, suggesting that increments in intracellular calcium cause degranulation with release of granule contents.
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