Resumen de Características bioquímicas de una proteína antibacteriana aislada del veneno de Lachesis muta "Shushupe"

Yori Cisneros, Fanny Lazo, Susana Gutiérrez, Armando Yarlequé

• español

  Se ha purificado una L-aminoácido oxidasa (LAO) del veneno de Lachesis muta a través de una columna de intercambio catiónico en CM-Sephadex C-50 y una filtración molecular en Sephadex G-100 SF a pH 6 con buffer acetato de amonio 0,1M. LAO fue recuperada con un rendimiento del 32% y una purificación de 8 veces; mostrando una sola banda electroforética en PAGE-SDS en condiciones reductoras, con un peso molecular de 60,6 kDa. La enzima es una proteína ácida homodimérica, con pH óptimo de 7,5 usando L-leucina como sustrato, además fue fuertemente afectada por la diálisis y en presencia del ion Zn2+ 7,5mM pierde hasta el 63% de su actividad inicial; de la misma manera es inhibida por L-cisteína, ácido yodoacético y glutation; en tanto que EDTA y el ácido glutámico no la afectan. Los ensayos con cultivos bacterianos de Staphylococcus aureus y Vibrio cholerae mostraron la potencia de LAO para inhibir el crecimiento, tanto por el método de cilindro en placa como en disco, por lo que se concluye que se trata de una proteína antibacteriana que afecta a microorganismos Gram positivos y Gram negativos.

• English

  An L-amino acid oxidase from the venom of Lachesis muta snake was obtained through CM-Sephadex C-50 cation-exchange chromatography followed by Sephadex G-100 SF gel filtration at pH 6 with 0,1M ammonium acetate buffer. LAO was recovered with 32% of yield and 8 folds showing a single electrophoretical band on PAGE-SDS with 60,6 kDa molecular weight under reduction conditions. It is an acid protein and homodimeric protein with 7,5 as optimum pH using L-leucine as substrate. Dialysis produced a severe effect on this activity, while 7,5 mM Zn2+ ions produced low activity until 63%. In the same manner, the enzyme was inhibited by L-cysteine, iodoacetate and glutation. Glutamic acid and EDTA were unaffected agents. Assays on Staphylococcus aureus and Vibrio cholerae bacterial cultures showed a potent grow inhibition. Therefore LAO is an antibacterial protein either on Gram positive and Gram negative bacterials.