La microbiota gastrointestinal humana es una de las comunidades microbianas más diversa y compleja que se puede encontrar en la naturaleza. Las nuevas tecnologías de secuenciación permiten obtener una amplia visión de la diversidad microbiana, lo que ha revelado una gran cantidad de bacterias no cultivables. A pesar del potencial de estas tecnologías de alto rendimiento la metagenómica no muestra la imagen completa. La citometría de flujo es una metodología que permite describir y/o separar fracciones de comunidades microbianas basándose en características como el DNA, RNA o proteínas, así como de la misma taxonomía microbiana. La citometría de flujo y la separación de células junto con las secuenciación del gen 16S rDNA nos otorga una visión muy detallada de la compleja comunidad microbiana que habita el intestino humano. Los objetivos de la Tesis son: 1. Caracterizar la estructura poblacional de las bacterias sobre- e infra-representadas en la microbiota intestinal humana, utilizando sondas fluorescentes contra el 16S rRNA, fraccionamiento por citometría de flujo y secuenciación de genotecas del 16S rDNA para estudiar su composición. 2. Estudiar la variación de componentes celulares (DNA y RNA) a lo largo de una curva de crecimiento de Escherichia coli , utilizando una aproximación basada en células individuales. 3. Identificar y caracterizar la fracción activa de la microbiota intestinal humana. 4. Estudiar la relación de la microbiota intestinal humana con el sistema inmune, utilizando citometría de flujo para identificar las bacterias marcadas con IgA.
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